Nephrin、podocin在糖尿病腎病模型鼠中的作用及羅格列酮和洛沙坦對其的影響.pdf

1、研究背景：糖尿病腎病(DN)是糖尿病(DM)最嚴(yán)重的血管并發(fā)癥之一，也是導(dǎo)致終末腎衰竭的主要原因。因DN發(fā)病隱匿、病程遷延、早期診斷困難，且臨床上一旦出現(xiàn)大量蛋白尿，則腎臟損害往往難以逆轉(zhuǎn)，患者將因此很快進(jìn)入尿毒癥期并需靠長期透析或腎移植來維持生命。透析腎移植治療不僅給患者及其家庭、社會帶來巨大經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，而且進(jìn)入終末期腎臟疾病(ESRD)的DN患者其預(yù)后也較非糖尿病患者更差，病死率更高。因此，深入開展DN發(fā)病機(jī)制及防治措施的研究不僅是全

2、球醫(yī)學(xué)研究的熱點，而且也是我國從事腎臟病研究工作者的責(zé)任與義務(wù)。 腎小球濾過屏障由腎小球血管內(nèi)皮細(xì)胞、基底膜、臟層上皮細(xì)胞(足細(xì)胞)足突構(gòu)成，DN的主要臨床表現(xiàn)為蛋白尿，當(dāng)腎小球濾過膜的完整性及其功能發(fā)生改變時則產(chǎn)生蛋白尿，即蛋白尿是反映腎小球濾過屏障對血漿蛋白通透性增高的特征性臨床表現(xiàn)。既往研究者對DN蛋白尿的發(fā)生機(jī)制主要從內(nèi)皮細(xì)胞、系膜細(xì)胞及其基質(zhì)等角度進(jìn)行研究，而單從腎小球足細(xì)胞結(jié)構(gòu)與功能改變角度研究DN發(fā)病機(jī)制的文獻(xiàn)報道

3、甚少。近年來，足細(xì)胞及其相關(guān)分子損傷與DN的關(guān)系成為研究熱點。 足細(xì)胞足突通過α<,3>β整合素與α-β-dystroglycans鉚釘于腎小球基底膜(GBM)上；相鄰足突之間的裂孔膜是腎小球濾過屏障的重要結(jié)構(gòu)和功能單位，由nephrin、podocin、CD2AP等多種蛋白質(zhì)分子組成。研究表明，足細(xì)胞足突結(jié)構(gòu)改變或nephrin表達(dá)下調(diào)與DN蛋白尿有關(guān)，ACEI和ARB能通過阻止nephrin表達(dá)下調(diào)減輕DN蛋白尿；羅格列酮屬

4、TZDs胰島素增敏劑，通過與PPARγ結(jié)合而發(fā)揮作用；研究表明羅格列酮能通過改善腎小球高濾過減少糖尿病腎病微量白蛋白尿，那么，它是否能通過阻止足細(xì)胞損傷、維持nephrin的表達(dá)水平從而減輕蛋白尿和腎小球硬化?它對DN中podocin的影響如何?至今國內(nèi)外未見相關(guān)研究報道。 目的：本研究通過STZ鼠模型制備擬觀察DN大鼠足細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)及其相關(guān)分子nephrin、podocin表達(dá)的變化，以及羅格列酮、洛沙坦對其干預(yù)的影響，探討足

5、細(xì)胞相關(guān)分子nephrin、podocin在DN發(fā)病中的作用及PPARy激動劑和ARB治療DN的分子機(jī)制，為DN的防治提供理論依據(jù)。 方法：選擇清潔級wistar雄性大鼠35只，隨機(jī)分為5組：N組為正常大鼠對照組(n=10)，D組為DN大鼠模型組(11=10)，R組為羅格列酮(文迪雅)干預(yù)組(n=10，文迪雅5mg／Kg.d)，L組為洛沙坦(科素亞)干預(yù)組(n=10，科素亞50mg／Kg.d)，R+L組為羅格列酮+洛沙坦聯(lián)合干預(yù)

6、組(n=5，文迪雅5mg／Kg.d十科素亞50mg／Kg.d)。留24h尿用雙縮脲法檢測尿蛋白定量，心臟取血檢測Scr、血脂等，取腎組織行光鏡常規(guī)及電鏡超微結(jié)構(gòu)檢查，免疫組化法檢測腎臟nephrin、podocin、ColⅣ表達(dá)；RT-PCR法檢測nephrin、podocin-mRNA表達(dá)。 結(jié)果：與N組比較，DN大鼠D組出現(xiàn)①尿Pro排泄增多，Scr、TG、CHO及血、尿ColⅣ濃度增高(P<0.05或0.01)，Ccr在8

7、周時下降(P<0.01)；②腎組織內(nèi)nephrin、podocin蛋白和mRNA表達(dá)下調(diào)(P均

8、組、R+L組則無變化(P>O.05)：③nephrin、podocin蛋白和mRNA表達(dá)增加(P

9、，其它方面作用無顯著性差異(P均>O.05)。 結(jié)論：①DN大鼠尿蛋白排泄增多、腎功能異常的同時出現(xiàn)腎組織nephrin,podocin蛋白和mRNA表達(dá)減少及C01Ⅳ蛋白表達(dá)增多；腎小球足細(xì)胞數(shù)目減少、FP增寬甚至融合及GBM增厚。提示DN時存在足細(xì)胞分子nephrin、podocin表達(dá)異常和超微結(jié)構(gòu)改變。②DN大鼠nephrin、podocin蛋白表達(dá)與24小時尿蛋白排泄量及ColⅣ蛋白表達(dá)呈負(fù)相關(guān)、與Scr呈正相關(guān)，說明