犬問荊中主要黃酮成分的提取和富集工藝研究.pdf

1、在本實驗中采用低共熔溶劑作為新型的提取溶劑對中藥材犬問荊中主要黃酮類成分山奈酚-3，7-二-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷、芫花素-5-O-β-D-葡萄糖進行綠色高效提取，同時結(jié)合大孔吸附樹脂進行分離和富集。研究了負壓空化輔助低共熔溶劑提取的工藝，并對工藝參數(shù)進行系統(tǒng)優(yōu)化，建立了一套快速簡便的HPLC分析檢測方法和高效的富集分離工藝。結(jié)果如下：
　　1.建立了山奈酚-3，

2、7-二-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷、芫花素-5-O-β-D-葡萄糖苷四種黃酮化合物的HPLC-UV分析檢測方法:
　　色譜條件:色譜柱:Curosil-PFP column(5μm，250×4.6 mm i.d.);流動相:0.10％甲酸水溶液(A)-甲醇(B);柱溫30℃;檢測波長349.4 nm，341.1 nm，344.2 nm，330.4nm;流速1 mL/m

3、in;進樣量5μL;梯度洗脫條件:0-10 min，33-33％ B;10-12 min，33-36％ B;12-20 min,36-36％ B;20-22 min,36-44％ B;22-36 min,44-44％ B;36-40min,44-51％ B;40-50 min,51％-75％ B。
　　2.對犬問荊中四種黃酮化合物山奈酚-3，7-二-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、槲皮素-3-O-β-D-

4、葡萄糖苷、芫花素-5-O-β-D-葡萄糖苷的提取的工藝參數(shù)進行了Box-Behnken Design(BBD)實驗設計和工藝優(yōu)化，確定了最優(yōu)的負壓空化輔助低共熔溶劑提取的參數(shù):
　　低共熔溶劑:氯化膽堿/甜菜堿鹽酸鹽-乙二醇（摩爾比1∶1∶2，含水量20％）
　　負壓空化提取工藝參數(shù):提取壓力:-0.07 Mpa
　　提取溫度:63℃
　　液固比:27 mL/g
　　提取時間:20 min
　　在上述

5、優(yōu)化條件下進行了驗證實驗，四種黃酮化合物山奈酚-3，7-二-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷、芫花素-5-O-β-D-葡萄糖苷的平均提取率分別為4.85 mg/g、3.94 mg/g、1.95 mg/g、3.95 mg/g(n=3)，提取率優(yōu)于使用負壓空化輔助80％乙醇溶劑提取和超聲輔助低共熔溶劑提取的提取效率。
　　3.采用NKA-9、AB-8和HPD-826型號大孔吸附

6、樹脂直接富集分離低共熔溶劑提取液中黃酮類成分，其中HPD-826樹脂總體回收率最高，對山余酚-3，7-二-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷、芫花素-5-O-β-D-葡萄糖苷四種黃酮類成分的回收率為67.76％、64.40％、89.79％、79.17％，并且通過HPD-826樹脂分離后四種成分含量為3.51％、2.71％、1.87％、3.34％。
　　綜上所述，負壓空化輔助低