超聲改性裂褶多糖制備及免疫調(diào)節(jié)活性研究.pdf

1、裂褶多糖(SPG)是裂褶菌子實(shí)體、菌絲體或發(fā)酵液中提取出來的水溶性胞外多糖，具有增強(qiáng)免疫力和抗腫瘤的功效。但天然SPG分子量大(＞106 Da)，粘度較大，制約其應(yīng)用。本文采用超聲工藝對(duì)固體發(fā)酵SPG進(jìn)行降解處理，得到不同分子量的超聲裂褶多糖(USPG)級(jí)分;對(duì)這些USPG級(jí)分的初級(jí)結(jié)構(gòu)和流變性質(zhì)開展研究，并通過體外和體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的方法研究其免疫及抗腫瘤活性。主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下:
　　考察超聲處理對(duì)制備不同分子量裂褶多糖的影響

2、，結(jié)果表明，隨超聲時(shí)間和強(qiáng)度增強(qiáng)SPG的分子量逐漸降低，降解動(dòng)力學(xué)符合降解二級(jí)動(dòng)力學(xué)模型。最終選定降解超聲參數(shù):時(shí)間10 min，超聲強(qiáng)度796 W/cm2。同時(shí)結(jié)合乙醇分級(jí)沉淀和透析，最終得到3個(gè)USPG級(jí)分，USPG40、USPG60、USPG80，分子量分別集中在106-107 Da、105-106Da、104-105 Da，樣品純度分別為93.15％、90.56％、88.77％，單糖組成主要為葡萄糖，樣品均一性較好。
　　

3、通過紅外光譜和甲基化分析進(jìn)行研究，結(jié)果表明超聲處理并未改變糖鏈類型和鏈接方式。流變特性分析結(jié)果表明，SPG為假塑性流體，濃度升高到10 mg/ml時(shí)表現(xiàn)為固體特性（儲(chǔ)能模量G，＞損耗模量G"）。超聲處理后USPG40表現(xiàn)假塑性流體行為，而USPG60、USPG80表現(xiàn)出牛頓流體行為。對(duì)比同濃度下(5 mg/ml)裂褶多糖溶液，經(jīng)過超聲處理的USPG40在角頻率為1.1 s-1時(shí)表現(xiàn)出黏性行為（儲(chǔ)能模量G'＜損耗模量G"），USPG60在

4、較低角頻率0.05 s-1以后，表現(xiàn)出黏性行為，USPG80則完全表現(xiàn)出黏性行為。
　　通過體外實(shí)驗(yàn)的方法對(duì)SPG及USPG級(jí)分的免疫及抗腫瘤功效進(jìn)行研究。結(jié)果表明SPG組和USPG各級(jí)分(25-600μg/ml)對(duì)促進(jìn)脾淋巴細(xì)胞增殖、巨噬細(xì)胞RAW264.7的NO釋放和抑制乳腺癌細(xì)胞T-47D活性具有良好的功效。相比SPG，USPG級(jí)分具有更高的活性，USPG60的脾淋巴細(xì)胞增殖、巨噬細(xì)胞RAW264.7的NO釋放和抑制乳腺癌細(xì)

5、胞T-47D活性最佳。
　　采用體內(nèi)模型進(jìn)一步評(píng)價(jià)SPG和USPG級(jí)分的免疫及抗腫瘤功能。SPG和USPG級(jí)分的含多糖血清均可增強(qiáng)正常大鼠免疫功能，其中濃度20％的USPG60含多糖血清組對(duì)脾淋巴細(xì)胞增殖的促進(jìn)作用最強(qiáng)，血清中免疫因子IL-2(169.85 pg/ml)和TNF-α（85.62 pg/ml）含量最高。S180荷瘤小鼠的研究實(shí)驗(yàn)表明，SPG和USPG級(jí)分均可顯著增強(qiáng)荷瘤小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(DTH)、促進(jìn)LPS誘導(dǎo)的B