銅藻多糖分離純化及其抗氧化、免疫調(diào)節(jié)活性研究.pdf

1、本文主要研究從銅藻植物中提取得到的水溶性多糖，對(duì)傳統(tǒng)提取方法進(jìn)行優(yōu)化，并對(duì)該多糖基本性質(zhì)、體外抗氧化活性、純化后細(xì)胞水平抗氧化活性及免疫調(diào)節(jié)能力等方面進(jìn)行評(píng)價(jià)。主要研究成果如下:
　　1.多糖提取、分離純化及基本性質(zhì)研究
　　本章采用單因素試驗(yàn)與正交試驗(yàn)，比較水煮法、超聲法、酶解法對(duì)提取率的影響，確定最優(yōu)提取方案，提取率分別為:水提法4.39％;超聲法提取率為3.30％;酶解法5.61％。粗多糖通過Q-Sepharose F

2、ast Flow陰離子交換柱，對(duì)銅藻粗多糖進(jìn)行純化，得三個(gè)組分，其中SHS1單糖組成主要為Man、Glu、Glc A硫酸根含量為4.48％，蛋白含量為4.71％，糖醛酸含量為0.0316μg/8μg; SHS0.5單糖組成主要為ManA、GulA，硫酸根含量為2.95％，蛋白含量為5.86％，糖醛酸含量為0.072μg/8μg;粗多糖中硫酸基多糖含量為4.94％，蛋白含量為5.95％，糖醛酸含量為1.29μg/8μg。
　　2.S

3、HS抗氧化活性研究
　　本試驗(yàn)首先采用體外試驗(yàn)對(duì)粗多糖體外抗氧化活性進(jìn)行研究，研究結(jié)果表明，與空白組比較，多糖具有較強(qiáng)的抗氧化能力，并呈劑量依賴性，當(dāng)濃度為10mg/mL時(shí)，DPPH清除率達(dá)到32.3％，濃度為8 mg/mL時(shí)，抗脂質(zhì)過氧化能力為48.1％，濃度為10mg/mL時(shí)，超氧陰離子清除率為34.2％。同時(shí)建立雙氧水誘導(dǎo)RAW264.7巨噬細(xì)胞氧化損傷模型，研究多糖對(duì)氧化損傷細(xì)胞的保護(hù)作用。結(jié)果表明，與雙氧水單獨(dú)作用組比較

4、，200μg/mL SHS1預(yù)處理12h條件下，顯著提高胞內(nèi)SOD和GSH-PX的活性，并顯著降低胞內(nèi)ROS、iNOS、LDH等因子釋放量，通過RT-PCR實(shí)驗(yàn)可知，SHS1可顯著提高M(jìn)n-SOD及GSH-Px在mRNA水平的表達(dá)，綜上，多糖對(duì)雙氧水誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞氧化損傷起到保護(hù)作用，是一種有效的抗氧化劑。
　　3.SHS對(duì)RAW264.7細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)作用研究
　　通過建立四個(gè)模型，分別研究多糖單獨(dú)作用于細(xì)胞對(duì)免疫

5、因子的影響、在炎癥條件下對(duì)細(xì)胞免疫因子調(diào)節(jié)能力、對(duì)細(xì)胞炎癥反應(yīng)的保護(hù)作用及修復(fù)作用;其中多糖單獨(dú)處理細(xì)胞，多糖組與空白組、脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)和地塞米松(dexamethasone，DEX)處理組比較，結(jié)果表明SHSC單獨(dú)作用于RAW264.7細(xì)胞，顯著提高TNF-α及IL-10因子水平，但與LPS組、DEX組比較差異極顯著(P＜0.01);SHS1單獨(dú)作用細(xì)胞，濃度為200μg/mL時(shí)，與空白組及DE

6、X組比較，TNF-α、IL-10水平顯著增加(P＜0.05)，但較LPS組差異顯著(P＜0.05); SHS0.5單獨(dú)處理細(xì)胞，與空白組比較，抑炎作用顯著，但較DEX組比較，DEX組抑炎作用更強(qiáng)。在炎癥存在條件下，低濃度時(shí)，與陰性對(duì)照組比較，SHS1相比SHSC和SHS0.5抗炎效果最強(qiáng)，高濃度時(shí)，SHSC與陰性對(duì)照組比，抗炎效果較強(qiáng)，兩組分多糖抗炎效果與空白對(duì)照組及藥物對(duì)照組差異顯著;SHS0.5組分與空白組比較，顯著增加抑炎因子IL

7、-10釋放量，與DEX組比較差異不顯著，但與LPS組比較差異顯著;此外，對(duì)炎癥損傷的保護(hù)和修復(fù)作用實(shí)驗(yàn)中，比較多糖組與空白組，SHS1組分較粗多糖比較免疫調(diào)節(jié)能力強(qiáng)，主要通過抑制炎癥因子TNF-α表達(dá)起到保護(hù)細(xì)胞及修復(fù)炎癥損傷細(xì)胞的作用，而SHS0.5與LPS組比較，降低細(xì)胞因子IL-10水平，濃度為100μg/mL以上，與LPS組比較，顯著降低IL-10和TNF-α水平，對(duì)細(xì)胞免疫功能進(jìn)行調(diào)節(jié)。
　　綜上可知，SHS具有較強(qiáng)的抗