苦瓜多糖的純化及其免疫和抗氧化活性作用.pdf

1、苦瓜是人們生活中的一種常用蔬菜，同時也是重要的功能食品原料?，F(xiàn)代研究表明，苦瓜具有提高免疫力、降血糖、抑菌和抗氧化等作用，并明確苦瓜多糖(Momor dicachara ntia polysaccharide，MCP)是其重要生物活性成分之一。目前國內(nèi)外對MCP的研究主要集中在降血糖方面，對其抗氧化和免疫活性方面的研究較少，并且所用多糖樣品多為未經(jīng)純化的粗多糖，無法全面了解苦瓜多糖的作用機理、多糖活性組分與其活性作用之間的量效、構(gòu)效關(guān)系

2、。本文對MCP體內(nèi)外的抗氧化和免疫活性進行了深入研究，用抗氧化和免疫指標對分離組分進行了活性追蹤，并對獲得的活性組分進行結(jié)構(gòu)分析，旨在為MCP藥物及功能性食品開發(fā)提供一定的理論依據(jù)。主要結(jié)果如下：
　　 1、MCP提取工藝的優(yōu)化：在單因素實驗基礎(chǔ)上通過二次旋轉(zhuǎn)回歸組合設(shè)計實驗，對MCP的纖維素酶協(xié)同超聲波法提取工藝條件進行了優(yōu)化。結(jié)果表明：MCP最優(yōu)工藝條件為超聲波功率390W、纖維素酶量3500U/g(酶活≥200U/mg)、

3、料液比1∶38、時間40min、pH值5、溫度56℃。在此工藝條件下，苦瓜多糖的提取率為21.1％，比熱水浸提法、超聲波法、纖維素酶法分別提高了7.8％、13.5％和7.7％。
　　 2、MCP對免疫低下小鼠免疫活性的影響：從正常小鼠脾臟中獲取脾淋巴細胞，采取體外與多糖共同培養(yǎng)的方式，分析MCP對脾淋巴細胞體外增殖的影響，結(jié)果表明：MCP濃度在60～100μg/mL范圍時能直接和協(xié)同ConA促進體外培養(yǎng)的脾淋巴細胞增殖(P＜0.

4、01)，并具有雙向調(diào)節(jié)作用；采用環(huán)磷酰胺(CY)造模法建立免疫低下小鼠模型，灌胃不同濃度的苦瓜多糖，分析MCP對免疫抑制小鼠的巨噬細胞吞噬功能、血清溶血素含量、脾臟淋巴細胞轉(zhuǎn)化能力、NK細胞活性、脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)的影響，結(jié)果表明：150mg/（kg·d）和300mg/(kg·d)劑量MCP均能明顯提高免疫低下小鼠的巨噬細胞吞噬功能、血清溶血素含量、脾臟淋巴細胞轉(zhuǎn)化能力、NK細胞活性、脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)(P＜0.05),300mg/(k

5、g·d)劑量MCP能使免疫抑制小鼠的以上各項免疫指標均達到正常小鼠的水平(P＜0.05)。
　　 3、MCP的抗氧化活性研究：通過測定DPPH.、ABTS+自由基清除能力和Fe3+還原能力(FRAP)，考察了MCP體外的抗氧化能力，結(jié)果表明：MCP清除DPPH·和ABTS+的IC50分別為571.8μg/mL、737μg/mL，濃度在1.6mg/mL時，MCP對DPPH·和ABTS.+的清除率達90％以上；MCP的FRAP值為0

6、.187μmolFeSO4/mg，其還原能力與溶液呈顯著正相關(guān)(P＜0.01)。通過CY建立免疫低下小鼠模型，考察了MCP對體內(nèi)產(chǎn)自由基酶及自由基水平的影響，結(jié)果表明：CY使脾臟中XOD、NOS活力，胸腺中XOD、MPO、NOS活力顯著升高(P＜0.05)，使小鼠血清中T-AOC、T-SOD活力、胸腺中GSH含量顯著降低(P＜0.05)；MCP對CY引起的脾臟和胸腺中XOD、MPO的上升有顯著的拮抗作用(P＜0.05)，能顯著增加免疫低

7、下小鼠的T-AOC、T-SOD、GSH水平以及降低MDA含量，并能使以上各測試指標達正常水平(P＜0.05),但對NOS的活性無顯著影響。
　　 4、MCP的分離純化及活性組分的結(jié)構(gòu)分析：采用DEAE-52離子交換柱對MCP進行分級純化，得到6個單一多糖組分；將各組分進行ABTS自由基清除實驗和脾淋巴細胞增殖實驗，篩選得出MCP3、MCP6具有較好的抗氧化和免疫活性。對這兩個活性組分進行結(jié)構(gòu)分析，結(jié)果表明：MCP3和MCP6均是

8、不含蛋白和核酸的雜多糖。MCP3主要是由葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、甘露糖、木糖、鼠李糖6種單糖組成，分子量為2.00×104；MCP6主要是由葡萄糖、甘露糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖5種單糖組成，分子量為1.35×104。MCP3和MCP6具有多糖的特征吸收峰，其糖環(huán)為吡喃環(huán)，MCP3和MCP6糖環(huán)均有兩種連結(jié)方式，即α-型糖苷鍵和β-型糖苷鍵。
　　 本文的創(chuàng)新點在于：(1)建立了苦瓜多糖的纖維素酶協(xié)同超聲波法高效提取苦瓜多糖的