牛蒡多糖的提取純化及其抗氧化性研究.pdf

1、牛蒡別名惡實(shí)根、鼠粘根、牛菜等，屬于菊科牛蒡?qū)賰赡晟荼局参?，以肉質(zhì)根為產(chǎn)品。牛蒡多糖具有促進(jìn)生長、抑制腫瘤生長和抗菌，抗真菌作用。目前在我國做藥食兩用，近年來才開始對牛蒡的營養(yǎng)價值和藥理進(jìn)行研究。本文研究通過不同的提取方式提取牛蒡多糖，并優(yōu)化了提取工藝；研究優(yōu)化多糖的純化工藝；研究牛蒡多糖結(jié)構(gòu)信息表征；最后研究了粗多糖，脫蛋白多糖，純化多糖的抗氧化作用。研究結(jié)果如下：
　　 1.探討了熱水，超聲波輔助以及微波輔助浸提牛蒡多糖的

2、工藝。研究三種提取工藝的料水比，提取時間，提取溫度，乙醇濃度等因素對牛蒡多糖提取的影響。在單因素的基礎(chǔ)上，對熱水，超聲波輔助以及微波輔助浸提法進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化。結(jié)果顯示熱水浸提最佳條件為：料水比1:10，提取溫度80℃，浸提2h，提取率為3.94％。超聲輔助浸提最佳條件為料水比1:15，超聲輔助浸提25min，乙醇濃度80％，提取率為5.09％。微波輔助浸提最佳條件為料水比1:15，微波浸提25min，乙醇濃度為70％，提取率為4.09

3、％。對比三種提取工藝可以看出采用超聲輔助浸提牛蒡多糖的提取率最高。
　　 2.牛蒡多糖分離純化的研究中發(fā)現(xiàn)：Sevag法+酶法去除蛋白質(zhì)的方法比單純使用Sevag法或酶法更有優(yōu)勢，即采用酶法去除大部分蛋白質(zhì)后再采用Sevag法去除少部分的游離蛋白質(zhì)，其最主要優(yōu)勢在于多糖的損失小。水解使用中性蛋白酶，條件為45℃，0.5％酶量，1h，pH為7。小分子物質(zhì)的去除采用截留量為3000的透析袋流水透析36h。牛蒡多糖經(jīng)過Sephadex

4、G-75柱層析后分離出兩種多糖，本文收集大峰值部分。經(jīng)過紫外光譜分析表明此多糖是不含有蛋白質(zhì)，核酸的多糖，瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果表明純化后多糖純度較高。經(jīng)檢測旋光度為：-30.80。
　　 3.對多糖的研究顯示，多糖的各種生物活性與其結(jié)構(gòu)，構(gòu)像等有著密切的關(guān)系。在對牛蒡多糖的單糖組成的研究中發(fā)現(xiàn)：牛蒡多糖的薄層層析分析出其可能由葡萄糖，果糖，半乳糖組成。對牛蒡多糖的1HNMR譜分析表明多糖具有α和β兩種構(gòu)型的糖苷鍵，多糖由三種單糖組

5、成。也從側(cè)面表明了牛蒡多糖由葡萄糖，果糖，半乳糖三種單糖組成。通過高碘酸氧化反應(yīng)，說明牛蒡純多糖存在1→6鍵型，還存在大量的1→2或1→4鍵。1→6與1→2或1→4鍵型的數(shù)量比約為1:1.1。
　　 4.分別對牛蒡多糖粗多糖，脫蛋白多糖，純化多糖進(jìn)行體外抗氧化性試驗(yàn)，研究多糖在DPPH·體系中的抗氧化性，對豬油，芝麻油的抗氧化性，清除超氧陰離子，羥基自由基能力和還原力。結(jié)果表明：
　　 (1)DPPH·清除率：粗多糖、脫

6、蛋白多糖、純化多糖與DPPH·質(zhì)量比分別為3.84，4.00，4.74時，可以清除50％的DPPH·自由基，由此可得三種多糖的抗氧化性依次減弱；(2)過氧化值：粗多糖，脫蛋白多糖，純化多糖對豬油，芝麻油均有氧化抑制作用。三種多糖的氧化抑制效果依次減弱。抗氧化效果均是隨著添加量的增加而增強(qiáng)，豬油建議添加量在0.05％-0.1％；(3)羥基自由基：粗多糖，脫蛋白多糖，純化多糖濃度分別為0.28mg/mL，0.37 mg/mL，0.44mg/

7、mL時可清除50％羥基自由基，由此可得三種多糖對羥基自由基的清除能力依次減弱；(4)超氧陰離子自由基：粗多糖，脫蛋白多糖，純化多糖濃度分別為0.34 mg/mL，0.51 mg/mL，0.55mg/mL時可清除50％超氧陰離子，由此可得三種多糖對超氧陰離子的清除能力依次減弱；(5)還原力：粗多糖，脫蛋白多糖，純化多糖濃度分別為0.52 mg/mL，0.57mg/mL，0.59mg/mL時吸光度為0.5，由此可得三種多糖的還原力依次減弱。