松茸美白活性成分提取及其多糖分離純化.pdf

1、松茸作為一種純天然的珍稀名貴食用菌類，具有多種活性成分。目前研究比較深入的是其抗輻射功效，化妝品美白功效相對(duì)研究較少。本文以松茸作為研究對(duì)象，用水、60％乙醇、95％乙醇、乙酸乙酯、超臨界二氧化碳流體，對(duì)松茸活性成分進(jìn)行提取，同時(shí)，采用水提醇沉法制備松茸粗多糖，對(duì)得到的六種提取物進(jìn)行安全性測(cè)定、成分初步分析及美白功效評(píng)價(jià)，初步篩選松茸中發(fā)揮美白功效的活性部位及化學(xué)成分類型;對(duì)具有潛在美白活性的提取部位，通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)活性成分進(jìn)行提取

2、工藝優(yōu)化，用三氯乙酸脫蛋白法、分級(jí)醇沉、凝膠滲透色譜——十八角度激光散射聯(lián)用、凝膠層析等技術(shù)對(duì)其進(jìn)行分離純化及分子量的測(cè)定。具體內(nèi)容如下:
　　1.綜合六種不同方式提取松茸美白活性成分的得率、提取物的安全性、提取物的美白功效三個(gè)方面結(jié)果，確定松茸美白活性成分的類型為多糖類物質(zhì)，其最佳提取方法為水提醇沉法。
　　2.通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)確定了松茸多糖提取的優(yōu)化工藝:料液比1∶40，100℃下，浸提2.5h，提取次數(shù)以2次（

3、提取比例為98.0％）為宜，多糖得率為9.99％。
　　3.比較Sevag法脫蛋白與三氯乙酸法脫蛋白效果，確定選用三氯乙酸法脫蛋白，三氯乙酸合理用量為多糖溶液體積的10％，蛋白去除率為63.12％，多糖回收率為55.88％。
　　4.對(duì)松茸多糖進(jìn)行分級(jí)醇沉，得到TMSP-1-9九個(gè)組分。對(duì)分離純化各階段松茸多糖提取物分別進(jìn)行了酪氨酸酶抑制功效、清除DPPH自由基功效的測(cè)定。功效實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:松茸多糖具有抑制酪酸酶功效與抗氧化

4、功效，抑制率隨著純度和濃度的提高而提高，組分TMSP-6與TMSP-2為松茸多糖提取物中對(duì)酪氨酸酶起抑制作用的主要有效成分，組分TMSP-2為松茸多糖提取物中起清除DPPH作用的主要有效成分。
　　5.經(jīng)凝膠滲透色譜——十八角度激光散射聯(lián)用系統(tǒng)對(duì)分級(jí)醇沉產(chǎn)物進(jìn)行多糖分子量的測(cè)定，各組分重均分子量依次為:447000Da和29700 Da、227700Da和23850 Da、965700 Da和22240 Da、17040 Da、1

5、2120 Da、9090 Da、8023Da、8100 Da、7968 Da，其中TMSP-1-3各有2個(gè)亞組分。
　　6.根據(jù)各組分進(jìn)行酪氨酸酶抑制率、DPPH清除率測(cè)定，多糖分子量的測(cè)定結(jié)果，將TMSP-6～9合并，進(jìn)行Sephadex G-100凝膠層析;選擇TMSP-2，進(jìn)行Sephacryl S-300 HR凝膠層析。
　　7.對(duì)TMSP-6～9合并組分用Sephadex G-100凝膠分離純化，判斷其該組分中存在