平菇深層發(fā)酵技術(shù)及其多糖分離純化研究.pdf

1、本論文通過對(duì)平菇深層發(fā)酵工藝學(xué)研究，及平菇多糖的提取、純化分析，確定了平菇深層發(fā)酵、多糖的提取與純化的工藝條件。主要研究結(jié)果如下： 1.采用搖瓶培養(yǎng)，比較了5個(gè)平菇菌株的菌絲生物量和胞外多糖產(chǎn)生情況，確定其中的蘇引6號(hào)為實(shí)驗(yàn)菌株。 2.通過單因素和正交試驗(yàn)確定優(yōu)化發(fā)酵培養(yǎng)基為：葡萄糖6％，硫酸銨0.3％，玉米漿0.5％，KH<,2>PO<,4> 0.1％，MgSO<,4> 0.1％。利用此培養(yǎng)基搖瓶培養(yǎng)菌絲干重可達(dá)28.

2、82g/L，胞外多糖產(chǎn)量可達(dá)5.43g/L。 3.搖瓶發(fā)酵周期試驗(yàn)結(jié)果表明：在未控制pH的條件下，發(fā)酵液pH有著“先降、后升、再降”的變化規(guī)律，當(dāng)pH值第二次下降時(shí)，胞外多糖產(chǎn)量達(dá)到最大值，且胞外多糖產(chǎn)量的變化滯后于pH值的變化。因此，在平菇的深層培養(yǎng)中，可以把pH值的變化作為判斷發(fā)酵終點(diǎn)的重要參考指標(biāo)之一。10L發(fā)酵罐試驗(yàn)結(jié)果表明：培養(yǎng)5d時(shí)，菌絲干重可達(dá)16.67g/L，胞外多糖產(chǎn)量最大可達(dá)，5.22g/L，與搖瓶結(jié)果基本接

3、近。 4.采用離心方法分離菌絲體和發(fā)酵上清液，由上清液可提取胞外粗多糖，菌絲體經(jīng)熱水抽提得到胞內(nèi)粗多糖。菌絲體胞內(nèi)多糖的提取優(yōu)化條件為：濕菌絲體勻漿后，按料水比1：4加水，在55℃水浴中抽提6h，提取液加3倍體積的無水乙醇醇析。 5.采用蛋白酶與Sevag試劑相結(jié)合處理脫蛋白，然后透析除鹽，減壓濃縮的方法進(jìn)行粗多糖的初步純化。 6.采用DEAE一纖維素32柱層析對(duì)純化的多糖進(jìn)行了初步分離，用去離子水、0.1mol

4、/L NaHCO<,3>、0.1mol/L NaOH分段洗脫。胞外多糖(EPS)得到三個(gè)組分，分別命名為EPS-Ⅰ、EPS-Ⅱ、EPS-Ⅲ，其中EPS-Ⅱ?yàn)橹饕M分；胞內(nèi)多糖(MPS)也得到三個(gè)組分，分別命名為MPS-Ⅰ、MPS-Ⅱ、MPS-Ⅲ，其中MPS-Ⅰ、MPS-Ⅱ?yàn)橹饕M分。 7.采用SephadexG-200凝膠過濾層析對(duì)DEAE一纖維素32柱層析中的主要組分EPS-Ⅱ、MPS-Ⅰ和MPS-Ⅱ進(jìn)行了分級(jí)分離，每個(gè)組分分