雞腿蘑深層發(fā)酵技術(shù)及其多糖分離純化的研究.pdf

1、雞腿蘑是一種味道鮮美、營(yíng)養(yǎng)豐富、食藥兼用的大型真菌。雞腿蘑多糖具有降血糖、提高免疫活性、抗腫瘤等作用。目前它已被定為符合聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織(FAO)和世界衛(wèi)生組織(WHO)要求的集“天然、營(yíng)養(yǎng)、保健”三種功能為一體的16種珍稀食(藥)用真菌之一。由此可見(jiàn)，雞腿蘑是一種極具開(kāi)發(fā)潛質(zhì)和應(yīng)用前景的食(藥)用真菌。本試驗(yàn)選擇雞腿蘑作為研究對(duì)象，對(duì)它的深層發(fā)酵技術(shù)及其多糖的提取和分離純化進(jìn)行了研究，主要研究結(jié)果如下： 1、通過(guò)單因素和正交試驗(yàn)

2、，確定雞腿蘑發(fā)酵優(yōu)化培養(yǎng)基配方為：玉米淀粉4.0％，黃豆餅粉0.2％，蔗糖3.0％，KH<,2>PO<,4> 0.1％，MgS04 0.1％，CaSO<,4> 0.05％，玉米漿0.5％。 2、確定搖瓶發(fā)酵條件為：起始pH6，轉(zhuǎn)速170r/min，裝量系數(shù)為0.4，接種量10％。利用優(yōu)化后的發(fā)酵培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件進(jìn)行發(fā)酵周期試驗(yàn)，發(fā)酵時(shí)間為6d，此時(shí)胞外多糖含量可達(dá)1.46g/L，生物量可達(dá)17.70g/L。pH在整個(gè)發(fā)酵周期中由

3、初始的6.05降到5.43，變化不大。通過(guò)50L發(fā)酵罐試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在發(fā)酵120h時(shí)，鏡檢菌絲開(kāi)始老化，即中止發(fā)酵。此時(shí)測(cè)定生物量為15.70g/L，胞外多糖含量為1.24g/L。 3、通過(guò)一系列單因素試驗(yàn)，確定雞腿蘑發(fā)酵上清液胞外多糖的提取條件為：將發(fā)酵上清液pH調(diào)整至5，然后加入等體積無(wú)水乙醇，置于15℃溫度下醇析24h。在此條件下，胞外多糖得率為0.18％。通過(guò)L<,9>(3<'4>)正交試驗(yàn)確定了雞腿蘑菌絲體胞內(nèi)水溶性多糖的提

4、取條件為：濕菌絲體勻漿后微波處理3min，然后按料水比1：2加水，在55℃水浴中抽提6h，提取液用無(wú)水乙醇醇析。在此條件下，胞內(nèi)水溶性多糖得率約為1.03％。 4、采用Sevag法除蛋白，透析法脫鹽對(duì)雞腿蘑粗多糖進(jìn)行初步純化，并利用L<,9>(3<'4>)正交試驗(yàn)確定了Sevag法去蛋白的條件為：V<,樣品>：V<,氯仿+正丁醇>=1：1，V<,氯仿>：V<,正丁醇>=5：1，振蕩時(shí)間為30min。在此條件下，粗多糖中蛋白去除率

5、約為69％。 5、通過(guò)DEAE一纖維素32柱層析對(duì)經(jīng)過(guò)初步純化的雞腿蘑粗多糖進(jìn)行了分級(jí)分離，用去離子水、NaHCO<,3>、NaOH洗脫時(shí)，發(fā)酵液胞外粗多糖(CEP)和菌絲體胞內(nèi)粗多糖(CMP)都分別至少含有3個(gè)多糖組分，其中CEP-Ⅱ(酸性多糖)和CMP-I(中性多糖)占大部分。然后把CEP-Ⅱ和CMP-1分別用Sephadex G-200凝膠過(guò)濾色譜再進(jìn)行分級(jí)分離，又分別得到分子量大小十分接近的兩個(gè)組分CEP-Ⅰ-1、CEP