液體深層發(fā)酵羊肚菌水溶性多糖的提取分離純化分析.pdf

1、本試驗運用液體深層發(fā)酵技術(shù)制備羊肚菌菌絲體，并對多糖的測定方法進行了研究，分別利用超聲波提取法和超濾濃縮純化法成功得從羊肚菌中提取了胞內(nèi)多糖和胞外多糖并確定了其最佳提取工藝條件。最后，將提取出的水溶性多糖進行純化，分離工作的研究。 在多糖的測定方法方面，由于在實驗中發(fā)現(xiàn)受到發(fā)酵液中夾帶的糖類物質(zhì)(如淀粉，蔗糖)等物質(zhì)的干擾，其有效羊肚菌胞外多糖的含量測定會受到較大影響。國內(nèi)報道測定食用菌胞外多糖的方法中幾乎沒有提到雜帶多糖對結(jié)果

2、的影響。因此，本實驗對這一問題進行了研究，分別以傳統(tǒng)的苯酚一硫酸法和改進的ROBERTS銅方法進行羊肚菌胞外多糖測定，實驗表明用ROBERTS銅法所測多糖含量僅占苯酚硫酸法所測多糖含量的17.3％，證明用ROBERTS銅法測定羊肚菌胞外多糖更準確一些。 運用超聲波提取技術(shù)研究了羊肚菌菌絲體多糖的提取。試驗在單因素實驗基礎(chǔ)上采用正交試驗研究了羊肚菌多糖最佳的超聲波提取方法，確定的優(yōu)化條件為：提取時間20 min，料液比(g:mL)

3、1:10，超聲波功率960W，提取次數(shù)2次，在此條件下樣品中羊肚菌多糖提取量為1.14％。超聲波浸提法可以有效地降低提取溫度，縮短提取時間，節(jié)約能源成本和時間。 運用超濾技術(shù)研究了膜裝置在羊肚菌胞外多糖濃縮純化過程中的應(yīng)用，確定超濾技術(shù)在羊肚菌胞外多糖濃縮純化過程中的最佳條件。以截留率和膜通量為參數(shù)，分別從超濾膜大小，超濾壓力，超濾溫度三個因素優(yōu)選出最佳超濾條件。結(jié)果發(fā)現(xiàn)羊肚菌胞外多糖的最佳超濾條件為：采用截留分子量為10KDa

4、的超濾膜，超濾壓力為0.100Mpa，超濾溫度為20℃。在此條件下，胞外多糖截留率可達到95.72％。 最后對羊肚菌菌絲體和發(fā)酵液中提取的多糖進行分離、純化和組成分析。提取出的粗多糖用sevage法反復(fù)脫蛋白，經(jīng)DEAE-52陰離子纖維素色譜、Sephadex-100凝膠過濾色譜等方法進一步分離純化，高效凝膠過濾法(HPGPC)鑒定純度及相對分子質(zhì)量，紅外光譜IR分析多糖的比旋光度和化學(xué)組成。結(jié)果從羊肚菌發(fā)酵液中提取得三種多糖(