松果菊苷對(duì)秀麗隱桿線蟲壽命的影響及分子機(jī)理研究.pdf

1、松果菊苷（Echinacoside，ECH）是一種植物多酚化合物，最初于北美松果菊屬狹葉松果菊分離出來。后經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，肉蓯蓉中可以提取出大量高純度的松果菊苷。目前報(bào)道松果菊苷的藥理作用有抗氧化、抗炎、神經(jīng)保護(hù)、保護(hù)肝臟、清除自由基等。但是尚沒有文獻(xiàn)報(bào)道松果菊苷是否具有體內(nèi)抗衰老活性。
　　目的：本研究旨在評(píng)價(jià)松果菊苷對(duì)于線蟲壽命的延長(zhǎng)作用并探討松果菊苷延長(zhǎng)線蟲壽命的作用機(jī)制。
　　方法：1.壽命實(shí)驗(yàn)：線蟲分為松果菊苷0μM（

2、對(duì)照組）、50μM、150μM、300μM、600μM組，通過壽命實(shí)驗(yàn)初步判斷藥物的抗衰老效果，并篩選出最佳體外給藥濃度。2.壓力應(yīng)激實(shí)驗(yàn)：進(jìn)行37℃熱應(yīng)激實(shí)驗(yàn)、百草枯氧化應(yīng)激實(shí)驗(yàn),佐證壽命實(shí)驗(yàn)同時(shí)檢測(cè)松果菊苷是否通過提高線蟲壓力應(yīng)激能力延長(zhǎng)線蟲壽命。4.產(chǎn)卵實(shí)驗(yàn)：對(duì)比給藥組線蟲和空白組線蟲的產(chǎn)卵時(shí)期和產(chǎn)卵量，檢測(cè)松果菊苷在延長(zhǎng)線蟲壽命的同時(shí)是否影響其生殖能力。4.咽泵實(shí)驗(yàn)：通過對(duì)比給藥組線蟲和空白組線蟲每分鐘的咽泵次數(shù)，檢測(cè)藥物對(duì)于線

3、蟲攝取食物能力的影響。5. daf-16(mgDf50)突變株壽命實(shí)驗(yàn)：線蟲分為松果菊苷0μM（對(duì)照組）、300μM組，檢測(cè)松果菊苷對(duì)daf-16基因缺失突變線蟲壽命的影響。6. DAF-16的亞細(xì)胞定位實(shí)驗(yàn)：在熒光顯微鏡下觀察DAF-16::GFP轉(zhuǎn)基因蟲株經(jīng)300μM松果菊苷處理后DAF-16::GFP的亞細(xì)胞定位情況。7.熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)：對(duì)線蟲給藥一段時(shí)間后，提取線蟲總RNA，利用熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)檢測(cè)線蟲體內(nèi)DAF-16下游

4、基因sod-3,hsp-16.2和ctl-1的表達(dá)量的變化。
　　結(jié)果：1.松果菊苷在適宜的濃度范圍內(nèi)可以延長(zhǎng)線蟲的壽命，300μM為最佳用藥劑量。2.300μM松果菊苷能提高線蟲在急性熱應(yīng)激和急性氧化應(yīng)激環(huán)境下的生存率，進(jìn)一步證實(shí)了松果菊苷具有抗衰老的作用。3.松果菊苷在延長(zhǎng)壽命的同時(shí)不會(huì)損害線蟲的生殖能力。4.松果菊苷不影響線蟲的咽泵頻率，提示我們藥物的抗衰老作用不是通過熱量限制途徑實(shí)現(xiàn)的。5.分子機(jī)制研究表明：松果菊苷促進(jìn)D