陰離子交換轉運蛋白Pendrin在急性肺損傷小鼠模型中的作用和干預研究.pdf

1、目的:
　　研究表明急性肺損傷/ARDS時患者存在氣道尤其是小氣道的功能受損和障礙，如氣道阻力升高，產生存在內源性呼氣末正壓和/或呼吸系統(tǒng)壓力-容積曲線拐點較低等，其與氣道炎癥、細胞外基質重塑和上皮剝脫有關。且研究證實氣道上皮和肺泡上皮在炎癥發(fā)生發(fā)展的演變過程中存在相似的生物學特性，急性肺損傷/ARDS時氣道上皮的炎癥等過程可能對ARDS的發(fā)生發(fā)展發(fā)揮重要作用。故氣道上皮細胞可能可作為靶點用于發(fā)掘治療急性肺損傷/ARDS的新藥物和

2、新的治療策略?，F(xiàn)已明確存在于氣道上皮的陰離子轉運蛋白Pendrin(SLC26A4)參與哮喘、COPD、百日咳等呼吸系統(tǒng)疾病的病生理學過程。至今，尚無Pendrin(SLC26A4)在急性肺損傷/ARDS作用和地位的研究。Pendrin(SLC26A4)是否在肺泡上皮表達也不得而知。
　　本研究的目的旨在揭示Pendrin(SLC26A4)在急性肺損傷/ARDS的作用，同時明確該蛋白是否在肺泡上皮表達，明確氣道上皮Pendrin(

3、SLC26A4)是否可作為靶點用于急性肺損傷的治療。
　　方法:
　　氣管內滴注LPS誘導構建急性肺損傷C57BL/6小鼠模型。利用ELISA、CBA流式技術等檢測肺組織和BALF中炎癥指標，如組織學、炎癥因子、BALF總蛋白和白細胞含量、肺水腫程度等評估模型。應用RT-PCR和Westem蛋白印跡、免疫組化、免疫熒光技術檢測分析Pendrin在肺組織中的轉錄和表達，并利用免疫熒光雙標定位技術確定肺泡上皮是否存在Pendri

4、n的表達。LPS造模后1h用Pendrin的抑制劑醋甲唑胺(5mg/kg)皮下注射，每12h重復一次。應用ELISA、CBA流式技術等評估分析肺部急性炎癥指標。每組實驗均設計對照，并重復3次。模型和干預的觀察時長均為48h。應用GraphPad Prism6.0軟件進行數據統(tǒng)計分析和作圖，符合正態(tài)分布的數據資料采用配對/非配對t檢驗分析比較組間差異，對不符合正態(tài)分布的數據進行變量轉換為正態(tài)分布進行分析，P＜0.05認為具有統(tǒng)計學差異。<

5、br>　　結果:
　　氣管內滴注LPS可穩(wěn)定構建急性肺損傷小鼠模型。與PBS組相比，LPS模型組肺組織SLC26A4基因的轉錄和Pendrin蛋白的表達明顯上調。醋甲唑胺干預可減輕緩解肺部彌漫性肺泡損傷的病理改變，降低肺組織和BALF中炎癥因子IL-6和MCP-1的濃度，減少肺組織MPO的分泌，使BALF中總蛋白含量和肺濕干比降低。醋甲唑胺干預后BALF中分類細胞計數巨噬細胞的比例增加。利用免疫熒光雙標技術在ATⅡ細胞上定位到Pe