陰離子交換轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Pendrin在急性肺損傷小鼠模型中的作用和干預(yù)研究.pdf

1、目的:
　　研究表明急性肺損傷/ARDS時(shí)患者存在氣道尤其是小氣道的功能受損和障礙，如氣道阻力升高，產(chǎn)生存在內(nèi)源性呼氣末正壓和/或呼吸系統(tǒng)壓力-容積曲線拐點(diǎn)較低等，其與氣道炎癥、細(xì)胞外基質(zhì)重塑和上皮剝脫有關(guān)。且研究證實(shí)氣道上皮和肺泡上皮在炎癥發(fā)生發(fā)展的演變過程中存在相似的生物學(xué)特性，急性肺損傷/ARDS時(shí)氣道上皮的炎癥等過程可能對(duì)ARDS的發(fā)生發(fā)展發(fā)揮重要作用。故氣道上皮細(xì)胞可能可作為靶點(diǎn)用于發(fā)掘治療急性肺損傷/ARDS的新藥物和

2、新的治療策略。現(xiàn)已明確存在于氣道上皮的陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Pendrin(SLC26A4)參與哮喘、COPD、百日咳等呼吸系統(tǒng)疾病的病生理學(xué)過程。至今，尚無Pendrin(SLC26A4)在急性肺損傷/ARDS作用和地位的研究。Pendrin(SLC26A4)是否在肺泡上皮表達(dá)也不得而知。
　　本研究的目的旨在揭示Pendrin(SLC26A4)在急性肺損傷/ARDS的作用，同時(shí)明確該蛋白是否在肺泡上皮表達(dá)，明確氣道上皮Pendrin(

3、SLC26A4)是否可作為靶點(diǎn)用于急性肺損傷的治療。
　　方法:
　　氣管內(nèi)滴注LPS誘導(dǎo)構(gòu)建急性肺損傷C57BL/6小鼠模型。利用ELISA、CBA流式技術(shù)等檢測(cè)肺組織和BALF中炎癥指標(biāo)，如組織學(xué)、炎癥因子、BALF總蛋白和白細(xì)胞含量、肺水腫程度等評(píng)估模型。應(yīng)用RT-PCR和Westem蛋白印跡、免疫組化、免疫熒光技術(shù)檢測(cè)分析Pendrin在肺組織中的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，并利用免疫熒光雙標(biāo)定位技術(shù)確定肺泡上皮是否存在Pendri

4、n的表達(dá)。LPS造模后1h用Pendrin的抑制劑醋甲唑胺(5mg/kg)皮下注射，每12h重復(fù)一次。應(yīng)用ELISA、CBA流式技術(shù)等評(píng)估分析肺部急性炎癥指標(biāo)。每組實(shí)驗(yàn)均設(shè)計(jì)對(duì)照，并重復(fù)3次。模型和干預(yù)的觀察時(shí)長(zhǎng)均為48h。應(yīng)用GraphPad Prism6.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析和作圖，符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)資料采用配對(duì)/非配對(duì)t檢驗(yàn)分析比較組間差異，對(duì)不符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)進(jìn)行變量轉(zhuǎn)換為正態(tài)分布進(jìn)行分析，P＜0.05認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。<

5、br>　　結(jié)果:
　　氣管內(nèi)滴注LPS可穩(wěn)定構(gòu)建急性肺損傷小鼠模型。與PBS組相比，LPS模型組肺組織SLC26A4基因的轉(zhuǎn)錄和Pendrin蛋白的表達(dá)明顯上調(diào)。醋甲唑胺干預(yù)可減輕緩解肺部彌漫性肺泡損傷的病理改變，降低肺組織和BALF中炎癥因子IL-6和MCP-1的濃度，減少肺組織MPO的分泌，使BALF中總蛋白含量和肺濕干比降低。醋甲唑胺干預(yù)后BALF中分類細(xì)胞計(jì)數(shù)巨噬細(xì)胞的比例增加。利用免疫熒光雙標(biāo)技術(shù)在ATⅡ細(xì)胞上定位到Pe