鹽酸致小鼠急性肺損傷模型及機(jī)制研究.pdf

1、第一部分經(jīng)氣管單側(cè)精確滴注法制作小鼠單側(cè)急性肺損傷模型的研究
　　目的：
　　建立一種操作簡捷可靠、劑量精確的小鼠單側(cè)肺損傷模型的方法，本研究在總結(jié)既往氣管滴注方法的基礎(chǔ)上，對導(dǎo)管、滴注手法加以改進(jìn)，引入指示劑和脂多糖，通過肉眼觀察大體肺臟解剖和病理組織學(xué)變化，驗(yàn)證建立及完善一種簡捷可靠、劑量精確的小鼠單側(cè)肺導(dǎo)管滴注方法。
　　方法：
　　18只雄性健康C57BL/6J小鼠按照體重隨機(jī)分為3組：(1)正常對照組(

2、 normal saline, NS組)經(jīng)導(dǎo)管滴注無菌生理鹽水(1μl/g體重)至小鼠左肺；(2)伊文斯蘭組(Evans blue, EB組)同樣方法滴注0.05％伊文斯蘭-生理鹽水(1μl/g體重)至小鼠左肺；(3)脂多糖組(lipopolysaccharide, LPS組)則滴注脂多糖-生理鹽水(3.5 mg/Kg體重)至小鼠左肺；各組小鼠麻醉固定后，頸前皮膚消毒行氣管切開，暴露約5 mm氣管，導(dǎo)管經(jīng)口咽部插入左肺主支氣管，滴注無菌

3、生理鹽水/0.05%伊文斯蘭-生理鹽水/脂多糖-生理鹽水，隨后緩慢推注約30倍液體體積的空氣，將小鼠豎直放置5分鐘后，以仰臥位放置于小動物加熱板。(1)密切觀察實(shí)施經(jīng)導(dǎo)管氣管滴注后小鼠的情緒、活動、飲食水等狀態(tài)的變化；(2)滴注6h時，在小鼠清醒安靜狀態(tài)下測呼吸功能（Pehn），每只小鼠適應(yīng)5分鐘，待數(shù)值穩(wěn)定后檢測7~10 min；(3)滴注24 h時處死動物；取肺組織進(jìn)行病理分析。
　　結(jié)果：
　　小鼠在經(jīng)導(dǎo)管行氣管內(nèi)滴注

4、后均能正常存活，解剖小鼠顯示EB組小鼠左肺均勻分布伊文斯蘭，右肺無明顯異常；插管成功率為100%，NS組和EB組小鼠呼吸功能無明顯差異(P值＞0.05)，LPS組呼吸功能嚴(yán)重?fù)p傷，與NS組和EB組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P值＜0.001）；NS組和EB組小鼠肺組織病理切片H&E染色雙肺均無明顯病理學(xué)改變，LPS組小鼠肺出現(xiàn)嚴(yán)重急性肺損傷。
　　結(jié)論
　　經(jīng)導(dǎo)管氣管內(nèi)滴注方法制作小鼠單側(cè)肺損傷模型，操作方便、成功率高、重復(fù)性好、

5、用藥劑量精確可靠，能夠有效的實(shí)現(xiàn)小鼠肺部精準(zhǔn)定量、定位給藥，為臨床相關(guān)疾病的深入研究提供了一種改進(jìn)的有效而實(shí)用的方法。
　　第二部分鹽酸導(dǎo)致小鼠急性肺損傷機(jī)制研究
　　目的：
　　建立一種穩(wěn)定、規(guī)范的鹽酸導(dǎo)致小鼠急性肺損傷模型(Acute lung injury, ALI)，探索酸性物質(zhì)吸入性肺損傷的機(jī)制。
　　方法：
　　120只C57BL/6J小鼠隨機(jī)分為( hydrochloric acid, HCl

6、)組和生理鹽水( normal saline, NS)組，每組分5個試驗(yàn)時間點(diǎn)，即30 min、2 h、6 h、12 h和24 h。經(jīng)導(dǎo)管滴注0.1M HCl/NS(1μl/g體重)至左肺，檢測各時間點(diǎn)(30 min除外)小鼠的呼吸功能、肺濕干重比值( wet/dry weight, W/D)、支氣管肺泡灌洗液( bronchoalveolar lavage fluid, BALF)的白細(xì)胞計數(shù)和蛋白濃度，觀察肺組織病理學(xué)改變；免疫組化

7、研究ALI病程中炎性細(xì)胞浸潤變化；免疫印跡檢測肺組織中炎性因子的水平。
　　結(jié)果：
　　12 h HCl刺激組的呼吸功能嚴(yán)重失常(P值＜0.01vs NS組)，肺W/D明顯高于其他時間組(P值＜0.05)和對照組(P值＜0.01vs NS組)；BALF蛋白濃度和白細(xì)胞總數(shù)在6 h HCl刺激組達(dá)到峰值(P值＜0.05vs其他時間組，P值＜0.01vs NS組)；炎性因子IL-1β、TNF-α、NF-κB和IL-6在肺組織中表