靈芝三萜和靈芝多糖對小鼠急性肺損傷干預作用的比較研究.pdf

1、靈芝是我國具有悠久歷史的藥食兼用真菌，具有補氣安神，止咳平喘，延年益壽的功效。靈芝中含有多糖類、氨基酸類、三萜類、生物堿類等化合物，其中多糖和三萜類化合物是主要的兩類活性物質(zhì)。本研究采用醇提萃取和水提醇沉等方法提取分離出靈芝三萜類化合物和靈芝多糖，結(jié)合化學和波譜學方法分析了兩類活性物質(zhì)的化學成分;利用腹腔注射LPS構(gòu)建小鼠急性肺損傷模型，通過計數(shù)肺泡灌洗液(BALF)中細胞總數(shù)，測定肺組織、血清、BALF中的TNF-α、IL-1β含量和

2、肺組織中MPO含量，以及western blotting和EMSA分析炎性信號通路的表達情況，對靈芝三萜類化合物和多糖干預肺損傷作用進行比較。以期進一步闡明靈芝中起到主要預防肺損傷的有效成分，為研究靈芝預防肺損傷提供理論依據(jù)。主要研究結(jié)果如下:
　　(1)通過醇提萃取、水提醇沉、severg法脫蛋白等方法分別獲得靈芝三萜類化合物(GT)和靈芝多糖(GLP)這兩類活性物質(zhì)，利用高效液相、液質(zhì)聯(lián)用、紅外光譜法、PMP衍生化、GC-MS

3、等方法對活性物質(zhì)進行分析，GT主要由ganoderic acid C2、ganoderic acid C6、ganoderic acid G、ganoderic acid B和ganoderic acid E等物質(zhì)組成，與參考文獻結(jié)果相符，GLP主要由葡萄糖和少量的甘露糖、半乳糖組成，甲基化分析顯示糖苷鍵連接方式為1-linked D-Glcp、1，3-linked D-Glcp、1,4-linked D-Glcp、1,6-linked

4、 D-Glcp、1,2,6-linked D-Glcp、1,6-linked D-Galp、1,2,6-linked D-Galp和1,3,6-linked D-Manp。
　　(2)靈芝三萜類化合物和靈芝多糖對急性肺損傷小鼠炎性指標的干預作用比較:腹腔注射LPS致小鼠急性肺損傷后，小鼠體重明顯降低，肺組織濕/干比和肺系數(shù)均顯著升高，肺泡灌洗液(BALF)中的細胞總數(shù)明顯增加，肺組織中的髓過氧化物酶(MPO)含量升高，此外，肺組織

5、結(jié)構(gòu)遭到破壞，大量炎性細胞浸潤肺組織，支氣管收縮，肺泡壁毛細血管擴張充血，CD68陽性巨噬細胞在肺組織氣管內(nèi)聚集，表現(xiàn)出明顯的肺損傷和肺氣腫傾向。兩類藥物組均可有效抑制小鼠體重減輕和肺組織濕/干比及肺系數(shù)的升高，降低BALF中的細胞含量和肺組織中的MPO含量，緩解肺組織損傷程度，減少肺組織中炎性細胞的浸潤及陽性巨噬細胞的聚集，且表現(xiàn)出一定的劑量依賴關系。同時GLP藥物組的干預效果優(yōu)于GT藥物組，對急性肺損傷具有更好的保護作用。
　

6、　(3)靈芝三萜類化合物和靈芝多糖對急性肺損傷小鼠炎性信號通路的干預作用比較小鼠急性肺損傷后，與正常組相比，肺組織、血清和BALF中的促炎因子TNF-α、IL-1β含量顯著升高，上調(diào)肺組織中p-p38、p-ERK1/2、p-JNK、p-NFκBp65及IκB的蛋白表達水平及NF-κB和AP-1中的DNA結(jié)合活性。與模型組相比，兩類藥物組均可有效降低肺組織、血清和BALF中TNF-α、IL-1β含量，抑制MAPK和NF-κB炎性信號通路中