三萜、多糖高產(chǎn)靈芝菌株育種及生物特性測(cè)定.pdf

1、本研究通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)室靈芝菌株進(jìn)行袋栽和液體發(fā)酵實(shí)驗(yàn)，篩選優(yōu)良菌株，結(jié)合親緣分析結(jié)果確定雜交實(shí)驗(yàn)的親本菌株。通過(guò)原生質(zhì)體單核體技術(shù)獲得親本的單核菌株，隨后進(jìn)行單單雜交獲得雜交菌株。再對(duì)得到的雜交菌株進(jìn)行SRAP和ISSR分子標(biāo)記鑒定，之后通過(guò)分析其生物學(xué)特性，包括測(cè)定靈芝多糖、三萜的含量來(lái)篩選出優(yōu)秀的靈芝雜交菌株。
　　通過(guò)靈芝袋栽和液體發(fā)酵實(shí)驗(yàn)，分別對(duì)靈芝子實(shí)體和液體發(fā)酵菌絲進(jìn)行生物特性及多糖、三萜的含量進(jìn)行測(cè)定獲得了各項(xiàng)指標(biāo)突出的

2、親本菌株，結(jié)合親緣關(guān)系分析，選擇了親緣關(guān)系較遠(yuǎn)且優(yōu)秀性狀互補(bǔ)的親本菌株進(jìn)行配對(duì)雜交。
　　通過(guò)原生質(zhì)體單核化技術(shù)分別獲取了各親本菌株的單核菌株，共挑取再生單菌落1206個(gè)，最終篩選到各個(gè)親本菌株單核體共107個(gè)，單核化率為8.87％。按照分析確定的雜交組合進(jìn)行單核菌株單單雜交，共培養(yǎng)了967個(gè)單單雜交組合，經(jīng)過(guò)雜交菌株純化，最終得到的雜交菌株數(shù)量共計(jì)27個(gè)，雜交成功率為2.79％。
　　首先，通過(guò)觀察鎖狀聯(lián)合和拮抗反應(yīng)對(duì)獲得

3、的雜交菌株進(jìn)行初步鑒定，之后又通過(guò)SRAP和ISSR等分子標(biāo)記的方法對(duì)雜交菌株進(jìn)行進(jìn)一步驗(yàn)證，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示雜交菌株明顯不同于兩株雙核親本菌株，其遺傳特性分別源自于各自的兩株不同單核親本菌株。
　　將兩種背景下獲得的雜交菌株分別進(jìn)行袋栽和液體發(fā)酵實(shí)驗(yàn)，并測(cè)定子實(shí)體、液體發(fā)酵菌絲的干重以及子實(shí)體和液體發(fā)酵菌絲的三萜及多糖含量，對(duì)雜交菌株進(jìn)行評(píng)價(jià)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，雜交菌株0520-3可作為液體發(fā)酵菌絲高產(chǎn)新菌株，而雜交菌株0520-5不但