富硒靈芝三萜的誘導(dǎo)合成及抗癌活性研究.pdf

1、靈芝(Ganoderma)是一種藥用價(jià)值很高的名貴真菌，靈芝三萜是其主要活性物質(zhì)之一；硒是生命活動(dòng)的必需元素，二者對(duì)許多疾病都有防治作用。在綜合了近年來(lái)靈芝三萜類成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)、藥理活性成果以及硒化合物的抗癌作用和機(jī)理，總結(jié)了靈芝三萜和硒化合物的研究現(xiàn)狀基礎(chǔ)之上，本實(shí)驗(yàn)首次嘗試將三萜和硒進(jìn)行有機(jī)結(jié)合，以期達(dá)到優(yōu)化其生理和藥理功能的目的。 首先，建立了靈芝發(fā)酵菌絲三萜類化合物含量的檢測(cè)方法。即：以齊墩果酸作為標(biāo)準(zhǔn)品，用香草醛-高氯

2、酸發(fā)色體系進(jìn)行比色，確定靈芝發(fā)酵菌絲三萜含量測(cè)定的最佳反應(yīng)條件：水浴揮干樣品的氯仿溶液，加入0.3ml5﹪香草醛-冰醋酸、1.0ml高氯酸、反應(yīng)溫度為70℃、反應(yīng)時(shí)間為25分鐘進(jìn)行顯色反應(yīng)，光吸收波長(zhǎng)為550nm。 其次，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)生物轉(zhuǎn)化將硒富集到靈芝菌絲體中。實(shí)驗(yàn)證明：靈芝具有較強(qiáng)的富硒能力，可以在400ug/g的改良PDA培養(yǎng)基上正常生長(zhǎng)，菌絲體干重收獲率約為1﹪，經(jīng)過(guò)乙醇提取、氯仿萃取，得粗富硒靈芝三萜(rSeGT)的收

3、獲率約為3.97﹪，、進(jìn)一步經(jīng)硅膠柱層析，獲得四種富硒靈芝三萜組分(SeGT1，SeGT2.SeGT3，SeGT4)，且各組分富硒能力不同，以SeGT1富硒能力最強(qiáng)，為21.03ug/g。 第三，用MTT法對(duì)乙醇提取物(EEG)、氯仿萃取物(rSeGT)、及硅膠柱層析各組分(SeGT1、SeGT2、SeGT3、SeGT4)進(jìn)行的體外抑瘤效果進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)除SeGT4外均對(duì)K562細(xì)胞具有抑制作用，其中以SeGT1效果最佳，作用7

4、2h抑制率達(dá)78.14﹪，明顯比陽(yáng)性對(duì)照組GT1(不富硒的三萜組分)高；形態(tài)觀察可見細(xì)胞膜破損，細(xì)胞變形或出現(xiàn)胞芽和縊痕，透明度和亮度降低，細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)有異物感的顆粒，細(xì)胞增殖被抑制，活細(xì)胞數(shù)減少；電鏡下觀察到：細(xì)胞皺縮變小，胞漿致密，核固縮，染色質(zhì)濃集、邊聚化，形成不同形狀大小的塊狀，胞質(zhì)空泡化等。DNA電泳圖明顯具有凋亡細(xì)胞的DNA梯度條帶；流式細(xì)胞儀分析顯示：SeGT1作用細(xì)胞后S期細(xì)胞DNA的合成量遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于G1期細(xì)胞DNA合成量的