黑曲霉酸性β-甘露聚糖酶高產(chǎn)菌株的誘變育種及固態(tài)發(fā)酵.pdf

1、本研究論文以一株實(shí)驗(yàn)室保藏的酸性β-甘露聚糖酶產(chǎn)生菌黑曲霉(dspergillusniger)LW-1作為原始出發(fā)菌株，首先經(jīng)自然分離篩選出一株產(chǎn)酶較穩(wěn)定的N-9作為誘變出發(fā)菌株，再經(jīng)真空微波和甲基磺酸乙酯(EthylMethane-sulfonate，EMS)逐級誘變處理，采用基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基固態(tài)發(fā)酵篩選以及斜面?zhèn)鞔囵B(yǎng)，獲得了一株高產(chǎn)、穩(wěn)產(chǎn)β-甘露聚糖酶的E-30菌株。其產(chǎn)β-甘露聚糖酶活性達(dá)36675U/g干曲，是原始出發(fā)菌株(17

2、048U/g干曲)的2.15倍。E-30菌株三角瓶麩曲種子保藏兩個(gè)月，產(chǎn)酶活性穩(wěn)定。對AspergillusnigerE-30所產(chǎn)β-甘露聚糖酶進(jìn)行最適反應(yīng)pH和pH穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)，結(jié)果與Aspergillus，nigerLW-1一致，判定為酸性酶。 以誘變育種篩選出的Aspergillus，nigerE-30作為種源，對其三角瓶固態(tài)發(fā)酵工藝條件進(jìn)行優(yōu)化。經(jīng)單因素試驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，從有機(jī)碳源混合比例、有機(jī)氮源與有機(jī)碳源比、魔芋粉添

3、加量、玉米漿添加量、料水比、無機(jī)氮源的種類和添加量、KH2PO4加量、表面活性劑等方面，考察其對突變株E-30三角瓶發(fā)酵產(chǎn)酶的影響。獲得黑曲霉E-30最優(yōu)化發(fā)酵培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件為：250mL三角瓶裝基料(豆餅粉：玉米粉：麩皮=1.0：0.9：8.1)10.0g，魔芋粉0.7g，NH4NO30.185g，CaCl20.0125g，MgSO40.0125g，KH2PO40.036g，料水比為1:1.7，自然pH；最佳培養(yǎng)條件為：33℃靜置培

4、養(yǎng)96h，期間在24h翻曲1次。最高產(chǎn)酸性β-甘露聚糖酶酶活性為：55876U/g干曲。為優(yōu)化前的1.52倍。 以三角瓶優(yōu)化發(fā)酵培養(yǎng)基及發(fā)酵條件為基礎(chǔ)，對AspergillusnigerE-30曲盤發(fā)酵工藝條件進(jìn)行了較全面、系統(tǒng)的研究。制定了曲盤發(fā)酵進(jìn)程曲線(包括：曲盤發(fā)酵過程中β-甘露聚糖酶活性、曲料水分、還原糖含量、曲料pH、曲料中心溫度的變化)。根據(jù)進(jìn)程曲線，試驗(yàn)了曲料初始pH、發(fā)酵過程中加水量、通氣狀況改變和變溫操作對曲