江蘇省不同口岸白紋伊蚊遺傳特征分析.pdf

1、目的: 通過(guò)對(duì)不同基因型的分子標(biāo)記技術(shù)進(jìn)行比較，選出最適合對(duì)白紋伊蚊進(jìn)行鑒定和遺傳分析的分子標(biāo)記技術(shù)。并對(duì)江蘇省十個(gè)口岸的白紋伊蚊進(jìn)行溯源性分析，揭示白紋伊蚊的分布與地理距離和港口地域的相關(guān)性及其遺傳特征。
　　方法: 提取江蘇省十個(gè)口岸白紋伊蚊的DNA，將提取的線粒體DNA通過(guò)PCR對(duì)CoI基因進(jìn)行擴(kuò)增測(cè)序，測(cè)序結(jié)果在MEGA上通過(guò)ClustalW Multiple alignment模塊將堿基對(duì)齊并構(gòu)建鄰近法進(jìn)化樹(shù);將核糖體D

2、NA的ITS基因連接到質(zhì)粒載體中，經(jīng)克隆后進(jìn)行測(cè)序，通過(guò)測(cè)序結(jié)果構(gòu)建進(jìn)化樹(shù)并進(jìn)行Mantel檢驗(yàn);對(duì)基因組核DNA用AFLP技術(shù)進(jìn)行分析:通過(guò)高頻/低頻剪切酶(EcoRI/MseI)對(duì)核DNA進(jìn)行酶切和連接，通過(guò)優(yōu)化過(guò)的十對(duì)選擇性引物進(jìn)行再次擴(kuò)增后，經(jīng)毛細(xì)管電泳構(gòu)建“0”“1”矩陣，通過(guò)NTSYS軟件計(jì)算遺傳相似性系數(shù)和進(jìn)行Mantel檢驗(yàn)，并構(gòu)建UPGMA進(jìn)化樹(shù)。通過(guò)rDNA的ITS基因和核DNA的AFLP分析對(duì)江蘇省不同口岸的白紋伊

3、蚊進(jìn)行同源性分析。
　　結(jié)果: 通過(guò)三種方法對(duì)江蘇省十個(gè)口岸的白紋伊蚊進(jìn)行鑒定和同源性分析:1.通過(guò)對(duì)mtDNA-COI基因進(jìn)行擴(kuò)增可以很好的對(duì)白紋伊蚊進(jìn)行鑒定，但同源性較高，堿基差異較少，通過(guò)進(jìn)化樹(shù)分析遺傳差異較小，對(duì)不同地區(qū)的白紋伊蚊不能被很好的區(qū)分;2.核糖體DNA的ITS基因通過(guò)克隆測(cè)序后構(gòu)建的進(jìn)化樹(shù)表明江蘇省不同口岸的白紋伊蚊基因序列分為兩支，其中，連云港的白紋伊蚊與其他地區(qū)的差異較大，單獨(dú)聚成一支;在另一支中，無(wú)錫的白

4、紋伊蚊單獨(dú)為一支，常州、泰州、徐州和揚(yáng)州進(jìn)一步分化成一個(gè)小分支，而常州和泰州的白紋伊蚊在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步分化為一個(gè)較遠(yuǎn)的小分支;3.對(duì)核DNA進(jìn)行AFLP分析，通過(guò)毛細(xì)管電泳篩選出了最適合進(jìn)行白紋伊蚊AFLP分析的十對(duì)引物組合，共擴(kuò)增396條清晰可辨的基因片段，其中包括共有的位點(diǎn)31個(gè)，有差異的位點(diǎn)365個(gè)，多態(tài)性百分率為92.2％，多態(tài)性位點(diǎn)豐富，能很好的對(duì)白紋伊蚊的遺傳差異進(jìn)行區(qū)分。對(duì)江蘇省十個(gè)口岸的白紋伊蚊通過(guò)AFLP分析和ITS基

5、因檢測(cè)的Mantel檢驗(yàn)結(jié)果表明，白紋伊蚊的遺傳距離與地理距離不呈線性相關(guān)。而UPGMA進(jìn)化樹(shù)在相似性系數(shù)0.66處可以將江蘇省十個(gè)口岸的白紋伊蚊分為三支，常州、淮安、南京、南通、蘇州、泰州、徐州、揚(yáng)州八個(gè)地區(qū)的白紋伊蚊為一支，無(wú)錫和連云港各自分為一支。
　　結(jié)論: 實(shí)驗(yàn)表明rDNA-ITS基因的擴(kuò)增和核DNA的AFLP分析均能對(duì)白紋伊蚊進(jìn)行同源性分析，但AFLP分析是對(duì)全基因組進(jìn)行分析，能更好的反映出白紋伊蚊的遺傳差異。并揭示了