江蘇省不同口岸白紋伊蚊遺傳特征分析.pdf

1、目的: 通過對不同基因型的分子標(biāo)記技術(shù)進行比較，選出最適合對白紋伊蚊進行鑒定和遺傳分析的分子標(biāo)記技術(shù)。并對江蘇省十個口岸的白紋伊蚊進行溯源性分析，揭示白紋伊蚊的分布與地理距離和港口地域的相關(guān)性及其遺傳特征。
　　方法: 提取江蘇省十個口岸白紋伊蚊的DNA，將提取的線粒體DNA通過PCR對CoI基因進行擴增測序，測序結(jié)果在MEGA上通過ClustalW Multiple alignment模塊將堿基對齊并構(gòu)建鄰近法進化樹;將核糖體D

2、NA的ITS基因連接到質(zhì)粒載體中，經(jīng)克隆后進行測序，通過測序結(jié)果構(gòu)建進化樹并進行Mantel檢驗;對基因組核DNA用AFLP技術(shù)進行分析:通過高頻/低頻剪切酶(EcoRI/MseI)對核DNA進行酶切和連接，通過優(yōu)化過的十對選擇性引物進行再次擴增后，經(jīng)毛細管電泳構(gòu)建“0”“1”矩陣，通過NTSYS軟件計算遺傳相似性系數(shù)和進行Mantel檢驗，并構(gòu)建UPGMA進化樹。通過rDNA的ITS基因和核DNA的AFLP分析對江蘇省不同口岸的白紋伊

3、蚊進行同源性分析。
　　結(jié)果: 通過三種方法對江蘇省十個口岸的白紋伊蚊進行鑒定和同源性分析:1.通過對mtDNA-COI基因進行擴增可以很好的對白紋伊蚊進行鑒定，但同源性較高，堿基差異較少，通過進化樹分析遺傳差異較小，對不同地區(qū)的白紋伊蚊不能被很好的區(qū)分;2.核糖體DNA的ITS基因通過克隆測序后構(gòu)建的進化樹表明江蘇省不同口岸的白紋伊蚊基因序列分為兩支，其中，連云港的白紋伊蚊與其他地區(qū)的差異較大，單獨聚成一支;在另一支中，無錫的白

4、紋伊蚊單獨為一支，常州、泰州、徐州和揚州進一步分化成一個小分支，而常州和泰州的白紋伊蚊在此基礎(chǔ)上進一步分化為一個較遠的小分支;3.對核DNA進行AFLP分析，通過毛細管電泳篩選出了最適合進行白紋伊蚊AFLP分析的十對引物組合，共擴增396條清晰可辨的基因片段，其中包括共有的位點31個，有差異的位點365個，多態(tài)性百分率為92.2％，多態(tài)性位點豐富，能很好的對白紋伊蚊的遺傳差異進行區(qū)分。對江蘇省十個口岸的白紋伊蚊通過AFLP分析和ITS基

5、因檢測的Mantel檢驗結(jié)果表明，白紋伊蚊的遺傳距離與地理距離不呈線性相關(guān)。而UPGMA進化樹在相似性系數(shù)0.66處可以將江蘇省十個口岸的白紋伊蚊分為三支，常州、淮安、南京、南通、蘇州、泰州、徐州、揚州八個地區(qū)的白紋伊蚊為一支，無錫和連云港各自分為一支。
　　結(jié)論: 實驗表明rDNA-ITS基因的擴增和核DNA的AFLP分析均能對白紋伊蚊進行同源性分析，但AFLP分析是對全基因組進行分析，能更好的反映出白紋伊蚊的遺傳差異。并揭示了