IL-35在炎癥性腸病患者血清和腸粘膜組織中的表達.pdf

1、目的:
　　炎癥性腸病(inflammatory bowel disease，IBD)包括潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerativecolitis，UC)和克羅恩病(Crohn's disease，CD)，是一種慢性的腸道炎癥性疾病，在臨床上具有不易治愈、反復(fù)發(fā)作的特點，嚴重影響患者的生活質(zhì)量。盡管其發(fā)病原因不明，局部黏膜的過度免疫反應(yīng)在炎癥過程的起始和加劇中起重要作用，尤其是細胞因子在免疫反應(yīng)中有直接作用。白細胞介素35(interlu

2、kin35，IL-35)是新發(fā)現(xiàn)的炎癥抑制性因子，為IL-12家族中的最新成員，屬于Ⅰ型細胞因子超家族成員，IL-35具有IL-12家族的典型結(jié)構(gòu)特點，是由IL-12家族α鏈(IL-12α)p35和β鏈Ebi3兩個亞基通過二硫鍵共價相連組成的異源二聚體蛋白。既往研究表明人體組織中IL-35并不呈組成性表達，但是在炎癥刺激的情況下可表達與調(diào)節(jié)性T細胞及活化漿細胞。IL-35可通過促進調(diào)節(jié)性T細胞活化和抑制Th17細胞增殖而發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。

3、本研究擬通過測定健康人和炎癥性腸病患者血清及腸黏膜IL-35的表達水平，探討IL-35與炎癥性腸病的可能關(guān)系。
　　方法:
　　在山東大學(xué)齊魯醫(yī)院2013.9～2014.4根據(jù)腹痛、腹瀉、血便等臨床癥狀和結(jié)腸鏡檢查及病理結(jié)果，納入20例UC患者（其中輕度者6例，中度與重度者各7例）、7例CD患者。UC嚴重程度根據(jù)Mayo評分，而CD則根據(jù)CD活動指數(shù)評分(CDAI)進行評估。此外，納入因息肉復(fù)查的15例非IBD患者作為對照。

4、取實驗組和對照組禁食后血液，離心后取上清，用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測血清IL-35的表達水平。行結(jié)腸鏡檢查時，每位納入對象均取3塊活檢標(biāo)本，其中1塊標(biāo)本石蠟包埋進行染色分析，另外2塊存于-80℃用于后續(xù)RNA和蛋白質(zhì)的提取及測定，即用免疫組化、qRT-PCR和Western Blot對IL-35在腸粘膜組織中的表達進行定位、定量分析，比較并進行統(tǒng)計學(xué)分析。
　　結(jié)果:
　　血清IL-35的表達:UC組及CD組，血清I

5、L-35的表達水平均顯著低于對照組，在UC組輕度與中度、重度患者中表達存在統(tǒng)計學(xué)差異，但中度與重度之間無明顯差異。而且IL-35含量水平均隨著病情加重而降低，與嚴重度呈中度負相關(guān)(R=-0.636，P＜0.05)。
　　腸黏膜IL-35的表達:免疫組化法檢測對照組結(jié)腸黏膜不表達IL-35，UC及CD患者病變腸黏膜中的IL-35表達水平均明顯升高，患者染色陽性細胞位于炎癥浸潤的間質(zhì)，上皮細胞無表達，主要表達于單核淋巴細胞。qRT-P

6、CR檢測UC及CD患者病變腸黏膜中Ebi3及IL-12p35表達水平明顯高于正常黏膜，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。Ebi3及IL-12p35表達水平在UC和CD組的表達無統(tǒng)計學(xué)意義。而且兩者表達與UC活動性沒有明顯相關(guān)關(guān)系。Western Blot結(jié)果顯示IL-35在UC組與CD組表達水平高于對照組，且UC組比CD組表達水平高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。中重度UC表達水平比輕度略高，但差異無明顯統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論:
　　IL-35在IBD