骨性關(guān)節(jié)炎患者外周血白細(xì)胞中糖相關(guān)基因表達(dá)分析.pdf

1、目的:總結(jié)骨性關(guān)節(jié)炎中醫(yī)現(xiàn)狀及基因組學(xué)研究進(jìn)展，利用糖相關(guān)基因芯片技術(shù)比較骨性關(guān)節(jié)炎組與正常對(duì)照組之間外周血白細(xì)胞中糖基因轉(zhuǎn)錄水平的變化，研究骨性關(guān)節(jié)炎對(duì)外周血白細(xì)胞蛋白糖基化的影響，尋找與骨性關(guān)節(jié)炎相關(guān)的變化，探討骨性關(guān)節(jié)炎的分子機(jī)制，為骨性關(guān)節(jié)炎的檢測(cè)及治療提供幫助。
　　方法:選取15位骨性關(guān)節(jié)炎患者及15位健康志愿者，靜脈采血的方式抽取2.5ml外周血，制成外周血樣本保存，并將其分為骨性關(guān)節(jié)炎組和正常對(duì)照組。提取樣本RNA

2、，經(jīng)定量后，檢測(cè)其完整性，熒光標(biāo)記后與糖相關(guān)基因芯片雜交清洗。最后進(jìn)行芯片掃描及數(shù)據(jù)的讀取與分析，篩選差異表達(dá)基因，進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR驗(yàn)證分析。
　　結(jié)果:提取的外周血白細(xì)胞RNA28S，及18S條帶完整，無(wú)明顯降解;38個(gè)差異表達(dá)基因中，骨性關(guān)節(jié)炎組上調(diào)表達(dá)的基因有18個(gè)，下調(diào)表達(dá)的基因有20個(gè);基因芯片層聚類(lèi)分析顯示，骨性關(guān)節(jié)炎組與正常對(duì)照組糖相關(guān)基因表達(dá)分布存在差異;RT-PCR結(jié)果顯示，糖相關(guān)基因芯片篩選出的6個(gè)差異表

3、達(dá)基因在10個(gè)骨性關(guān)節(jié)炎患者中表現(xiàn)出相同的差異表達(dá)趨勢(shì);聚糖合成代謝通路分析顯示參與N-聚糖前體合成的DPM3和ALG8轉(zhuǎn)錄水平發(fā)生上調(diào)，GLB1和MAN2B1表達(dá)上調(diào)，O-聚糖合成方面，參與O聚糖Tn抗原(GalNAcα-Thr/Ser)合成的糖基轉(zhuǎn)移酶GALNT19和core2和core4結(jié)構(gòu)合成的糖基轉(zhuǎn)移酶GCNT3表達(dá)同時(shí)上調(diào)，因此我們推測(cè)，O-聚糖core2和core4結(jié)構(gòu)在骨性關(guān)節(jié)炎患者外周血白細(xì)胞中表達(dá)增加。
　　結(jié)

4、論:芯片數(shù)據(jù)經(jīng)歸一化處理及分析，共篩選出38個(gè)差異表達(dá)基因，其中18個(gè)在骨性關(guān)節(jié)炎組中表達(dá)上調(diào)，20個(gè)在正常對(duì)照組中表達(dá)水平較高。應(yīng)用實(shí)時(shí)定量RT-PCR對(duì)6個(gè)差異表達(dá)基因進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果與芯片結(jié)果一致。通過(guò)對(duì)差異表達(dá)基因進(jìn)行通路分析，骨關(guān)節(jié)炎外周血白細(xì)胞，硫酸化作用增高，糖鏈Galβ1-4GlcNAc降解作用增強(qiáng)，O-聚糖合成core2和core4結(jié)構(gòu)增多，而這些變化可能與骨性關(guān)節(jié)炎造成的滑膜炎性物質(zhì)釋放引起的免疫應(yīng)答有關(guān)，從而導(dǎo)致關(guān)節(jié)