膠質(zhì)瘤TJ905干細(xì)胞Livin-ShRNA裸鼠皮下種植瘤模型的建立及其對(duì)Caspase-3,7的影響.pdf

1、目的：
　　探討膠質(zhì)瘤TJ905細(xì)胞及其干細(xì)胞穩(wěn)轉(zhuǎn)基因Livin短發(fā)夾RNA（short hairpin RNA，shRNA）皮下種植瘤模型的建立及其對(duì)Caspase3,7 mRNA表達(dá)的影響。內(nèi)容：
　　從膠質(zhì)瘤TJ905細(xì)胞中分離膠質(zhì)瘤干細(xì)胞并進(jìn)行鑒定，分別用 Livin-shRNA和Negative-shRNA（陰性 shRNA）慢病毒重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染膠質(zhì)瘤 TJ905細(xì)胞及其干細(xì)胞，建立相應(yīng)的裸鼠皮下種植瘤模型，通過Ce

2、ll Counting Kit-8（CCK-8）、流式細(xì)胞術(shù)（Flow Cytometry，F(xiàn)CM）、RT-PCR等技術(shù)檢測Livin-shRNA對(duì)膠質(zhì)瘤TJ905細(xì)胞及其干細(xì)胞皮下種植瘤模型建立及Caspase3,7 mRNA表達(dá)的影響。方法：
　　使用無血清培養(yǎng)法聯(lián)合免疫磁珠法分選膠質(zhì)瘤 TJ905干細(xì)胞，并將分選后的細(xì)胞通過血清誘導(dǎo)分化、免疫熒光染色（Nestin、GFAP、β-tubulin）進(jìn)行鑒定，分別將 Livin-

3、shRNA和Negative-shRNA慢病毒重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入膠質(zhì)瘤TJ905細(xì)胞及其干細(xì)胞內(nèi)，RT-P C R檢測轉(zhuǎn)染效率，建立穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株；根據(jù)細(xì)胞是否轉(zhuǎn)染及其所轉(zhuǎn)染質(zhì)粒類型，將實(shí)驗(yàn)分為A組（轉(zhuǎn)染Livin-shRNA的膠質(zhì)瘤TJ905細(xì)胞組）、B組（轉(zhuǎn)染 Negative-shRNA的膠質(zhì)瘤 TJ905細(xì)胞組）、C組（未轉(zhuǎn)染的膠質(zhì)瘤TJ905細(xì)胞組）、D組（轉(zhuǎn)染Livin-shRNA的膠質(zhì)瘤TJ905干細(xì)胞組）、E組（轉(zhuǎn)染Negativ

4、e-shRNA的膠質(zhì)瘤TJ905干細(xì)胞組）、F組（未轉(zhuǎn)染的膠質(zhì)瘤TJ905干細(xì)胞組）；CCK-8檢測各組細(xì)胞增殖變化規(guī)律；FCM檢測各組細(xì)胞周期變化情況；RT-PCR技術(shù)檢測各組Caspase-3、Caspase-7 mRNA表達(dá)情況；建立相應(yīng)的裸鼠皮下種植瘤模型，觀察其成瘤特性，并檢測相應(yīng)腫瘤模型內(nèi) Caspase-3、Caspase-7 mRNA表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1、膠質(zhì)瘤TJ905細(xì)胞中含有少量的膠質(zhì)瘤干細(xì)胞

5、，其比例約為0.64％-0.91%；2、A組、B組、D組、E組Livin mRNA的相對(duì)表達(dá)量（相對(duì)于C組及F組）分別為0.117±0.017、0.996±0.025、0.193±0.014、1.003±0.033，A組、B組及D組、E組之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；說明Livin-shRNA可以明顯抑制膠質(zhì)瘤TJ905細(xì)胞及其干細(xì)胞Livin mRNA的表達(dá)；
　　3、CCK-8結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染48h后A組、B組、C組的

6、吸光度分別為0.828±0.031、1.377±0.026、1.437±0.027，轉(zhuǎn)染72h后 A組、B組、C組的吸光度分別為0.896±0.029、1.533±0.035、1.602±0.031，A組與B、C兩組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說明Livin-shRNA可抑制膠質(zhì)瘤TJ905細(xì)胞的增殖；
　　4、FCM結(jié)果顯示，A組、B組、C組G0／G1期細(xì)胞百分比分別為68.68±2.01、63.14±1.39、62.

7、97±1.79，A組與B、C兩組之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；D組、E組、F組S期細(xì)胞百分比分別為35.42±2.18、30.33±1.75、30.57±1.49， D組與E、F兩組之間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；說明Livin-shRNA可阻滯膠質(zhì)瘤TJ905細(xì)胞于G0／G1期，阻滯膠質(zhì)瘤TJ905干細(xì)胞于S期；
　　5、F組的成瘤率為100%，C組的成瘤率為37.5%，兩組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05

8、），說明膠質(zhì)瘤TJ905干細(xì)胞比膠質(zhì)瘤TJ905細(xì)胞有更強(qiáng)的致瘤性；A組與B組的成瘤率無明顯差異，但其腫瘤體積明顯降低，D組與E組的成瘤率及腫瘤體積均無明顯差異，說明 Livin-shRNA對(duì)膠質(zhì)瘤 TJ905細(xì)胞及其干細(xì)胞的致瘤性無明顯影響，但可使膠質(zhì)瘤TJ905細(xì)胞的增殖速度減慢；
　　6、A組、B組、D組、E組Caspase-3 mRNA的相對(duì)表達(dá)量（相對(duì)于C組及F組）分別為5.163±0.364、1.009±0.038、4

9、.076±0.043、1.116±0.031，A組、B組及D組、E組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；A組、B組、D組、E組Caspase-7 mRNA的相對(duì)表達(dá)量（相對(duì)于C組及F組）分別為3.067±0.157、1.039±0.022、2.993±0.109、1.045±0.046，A組、B組及D組、E組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；說明Livin-shRNA可誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤TJ905細(xì)胞及其干細(xì)胞內(nèi)Caspase-3、Cas