RNAi沉默ID-1基因?qū)Ω伟┘?xì)胞HepG2裸鼠皮下種植瘤及對(duì)ERK通路的影響.pdf

1、目的：探討ID-1特異的RNAi對(duì)人肝癌HepG2裸鼠皮下移植瘤的抑制作用，以及其對(duì)移植瘤中ID-1及p-ERK基因表達(dá)的影響。探討ID-1與ERK1/2信號(hào)通路在裸鼠皮下種植瘤增殖中的作用。
　　 方法：在BALB/C-nu系雄性裸鼠右腋皮下注射HepG2細(xì)胞5×106/0.2ml建立荷人肝癌HepG2裸鼠移植瘤模型15只。待腫瘤直徑約8mm時(shí)，把其隨機(jī)分為3組，空白組、陰性對(duì)照組、陽性組，每組5只。陽性組在后1天、4天、7天

2、、11天、15天分別注射甲基化的siRNA-ID-14nmol/100ul，對(duì)照組注射CONTROL-siRNA4nmol/100ul，空白對(duì)照組注射生理鹽水100ul。期間每周測量腫瘤體積，制作腫瘤生長曲線。28天后處死裸鼠，制作腫瘤組織標(biāo)本，進(jìn)行常規(guī)病理學(xué)檢查，半定量RT-PCR檢測ID-1、p-ERK1/2mRNA的表達(dá)情況，通過免疫組織化學(xué)來檢測ID-1、p-ERK1/2的蛋白表達(dá)。
　　 結(jié)果：裸鼠成瘤率100％，5天

3、后在皮下摸到小結(jié)節(jié)。注射甲基化Si-ID-1一周后陽性組的裸鼠腫瘤生長速度明顯減慢，瘤體增大不明顯，陰性對(duì)照組和空白組腫瘤體積繼續(xù)生長，體積每周都有增大。病理組織學(xué)顯示：肉眼觀察，陽性組的裸鼠腫瘤體積明顯較陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組??；顯微鏡下觀察，實(shí)驗(yàn)組的腫瘤細(xì)胞呈片狀變性壞死，多數(shù)細(xì)胞核完全溶解，細(xì)胞結(jié)構(gòu)消失，壞死的腫瘤組織呈現(xiàn)均質(zhì)、紅染表現(xiàn)，周圍腫瘤細(xì)胞與對(duì)照組相比殘留較少，空白對(duì)照組及陰性對(duì)照組HE染色見瘤細(xì)胞排列密集，細(xì)胞界限不清

4、，生長活躍，核大深染，有較多核分裂象。RT-PCR顯示si-ID-1組ID-1、p-ERK1/2mRNA表達(dá)明顯降低，與陰性對(duì)照組和空白組比較，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。免疫組化顯示實(shí)驗(yàn)組的ID-1、p-ERK1/2陽性反應(yīng)率較空白對(duì)照組及陰性對(duì)照組明顯減少，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論：人肝癌細(xì)胞HepG2移植瘤中ID-1、p-ERK1/2均高表達(dá)，應(yīng)用甲基化的siRNA靶向抑制ID-1基因可以顯著抑制裸鼠皮下移