肝癌HepG2細胞PHD3基因穩(wěn)定轉染細胞系的建立及其對裸鼠移植瘤生長增殖的影響.pdf

1、目的：建立PHD3基因穩(wěn)定轉染的肝癌HepG2細胞株及探討PHD3基因在裸鼠體內對調節(jié)肝癌移植瘤生長和浸潤中的作用，為進一步明確PHD3基因對肝癌的作用機制奠定基礎。
　　 方法：⑴pcDNA3.1-PHD3重組質粒及pcDNA3.1質粒轉染人肝癌HepG2細胞株。⑵轉染pcDNA3.1-PHD3重組質粒及pcDNA3.1空白質粒的人肝癌HepG2細胞株的陽性篩選與克隆。⑶轉染組為轉染有pcDNA3.1-PHD3重組質粒的人肝癌

2、HepG2細胞株，對照組為轉染有pcDNA3.1重組質粒的人肝癌HepG2細胞株。空白組為人肝癌HepG2細胞株。⑷裸鼠皮下成瘤:將轉染組、對照組及空白組細胞分別于裸鼠右腋下皮下注射以形成皮下腫瘤，每組注射10只。⑸裸鼠尾靜脈注射形成內臟轉移瘤:轉染組、對照組及空白組細胞分別于裸鼠尾靜脈注射以形成內臟轉移瘤，每組注射10只。⑹觀察轉染組、對照組及空白組細胞形態(tài)學改變。⑺腫瘤生長變化:每隔兩天用游標卡尺測量各組裸鼠皮下腫瘤的短徑(a)、長

3、徑(b)，按(a2×b)/2公式計算腫瘤體積，并記錄皮下腫瘤體積變化。⑻抑瘤率:抑瘤率=空白組腫瘤平均體積-轉染組腫瘤平均體積/空白組腫瘤平均體積x100％。⑼病理學檢查:裸鼠皮下及肝、肺臟內成瘤大小，浸潤范圍，腫瘤組織分化差異等。
　　 結果：①通過RT-PCR測定轉染組細胞中PHD3基因的表達，結果顯示轉染組細胞存在PHD3基因表達。②轉染組細胞呈橢圓形或短梭形，聚集成團，細胞之間連接疏散，狀態(tài)較差，生長受到抑制，細胞貼壁能

4、力差，易脫落，培養(yǎng)瓶中可見死亡細胞黑色殘骸。對照組和空白組細胞呈堆積生長，單個細胞形態(tài)不明顯，細胞之間交織緊密。細胞貼壁能力較好，細胞狀態(tài)好，生長旺盛。③轉染組裸鼠生活狀態(tài)較為正常、食欲旺盛、行動自如，無明顯體質衰弱狀況。空白組和對照組裸鼠逐漸出現食欲不振、精神萎靡、活動減少。④空白組裸鼠于接種后6天開始出現腫瘤，腫瘤的平均體積為462.22mm3。對照組裸鼠于接種后6天開始出現腫瘤，腫瘤的平均體積為457.88mm3。轉染組裸鼠于接種

5、后9天開始出現腫瘤，腫瘤的平均體積為294.79mm3。⑤抑瘤率:抑瘤率=空白組腫瘤平均體積-轉染組腫瘤平均體積/空白組腫瘤平均體積x100％。抑瘤率=462.22-294.79/462.22x100％=36.22％。⑥皮下成瘤:轉染組腫瘤大小及浸潤范圍均小于空白組和對照組，腫瘤分化稍好于空白組和對照組，腫瘤血管形成較空白組和對照組差。空白組和對照組之間無明顯差異。⑦內臟成瘤:轉染組內臟無形成明確的腫瘤，空白組和對照組肺部無形成腫瘤，肝