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1、目的：IDO可通過(guò)降解局部組織中的色氨酸來(lái)調(diào)節(jié)T細(xì)胞免疫，從而介導(dǎo)腫瘤的免疫逃逸。建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染IDO基因的HepG2細(xì)胞系，以探索及研究該基因的功能，為進(jìn)一步研究IDO基因在肝癌免疫逃逸中的作用奠定基礎(chǔ)。
方法：進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)制定合適的G418篩選濃度、維持濃度，應(yīng)用脂質(zhì)體將真核細(xì)胞表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1-IDO和空載質(zhì)粒pcDNA3.1轉(zhuǎn)染入HepG2細(xì)胞，經(jīng)G418進(jìn)行篩選后，挑取單克隆進(jìn)行培養(yǎng)，用逆轉(zhuǎn)錄酶聚合酶鏈反應(yīng)(
2、RT-PCR)和Westernblot方法驗(yàn)證獲得的表達(dá)細(xì)胞株。
結(jié)果：預(yù)實(shí)驗(yàn)篩選濃度確定為800ug/ml，維持濃度為400ug/ml；RT-PCR檢測(cè)顯示：pcDNA3.1-IDO轉(zhuǎn)染組成功擴(kuò)增出464bp的目的基因片段，pcDNA3.1轉(zhuǎn)染組及未轉(zhuǎn)染組未能擴(kuò)增出片段；WesternBlot檢測(cè)顯示，質(zhì)粒pcDNA3.1-IDO穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的HepG2細(xì)胞表達(dá)IDO蛋白，而質(zhì)粒pcDNA3.1穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞與未轉(zhuǎn)染
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