不同物理因素對離體人肝癌細(xì)胞系HepG2殺傷效應(yīng)的研究.pdf

1、原發(fā)性肝癌中90％以上為肝細(xì)胞癌(HCC)，而目前手術(shù)切除仍是肝癌治療中的首選手段。但肝癌切除術(shù)后復(fù)發(fā)率極高，單純切除后的5年復(fù)發(fā)率高達(dá)50％以上，而其中肝外轉(zhuǎn)移者又以腹腔轉(zhuǎn)移為最多24-26?，F(xiàn)代肝癌根治術(shù)應(yīng)包括充分的原發(fā)腫物和/或肝切除，徹底的淋巴結(jié)清除，完全的消滅腹腔游離癌細(xì)胞(freecancercell，F(xiàn)CC)，此三點(diǎn)中任何一方面均不容忽視。雖然腹腔內(nèi)FCC不一定形成種植，但腹腔是FCC生存的良好環(huán)境，腫瘤細(xì)胞散落在網(wǎng)膜組織

2、、胃壁、腸管壁、系膜及腹膜上，獲得一定的營養(yǎng)血供后即能形成腫瘤。在手術(shù)的探查、切除過程中，癌細(xì)胞的脫落并種植于腹腔是客觀存在的事實(shí)，由此影響HCC的治愈率及復(fù)發(fā)率。消除腹腔內(nèi)游離癌細(xì)胞和殘存微小癌灶對改善患者預(yù)后有重要意義。肝癌自發(fā)性破裂出血是原發(fā)性肝癌常見并發(fā)癥之一。肝癌破裂時(shí)，大量的癌細(xì)胞脫落進(jìn)入腹腔，成為FCC，成為日后復(fù)發(fā)的潛在病灶。對于HCC脫落細(xì)胞的腹腔內(nèi)種植，已引起外科醫(yī)生的重視，術(shù)中避免觸摸肝臟腫瘤以及減少對腫瘤擠壓的肝

3、切除手術(shù)已在臨床實(shí)施。如果能有效地殺滅腹腔游離癌細(xì)胞(FCC)，將對減少由FCC所導(dǎo)致的腫瘤復(fù)發(fā)有重要的意義。 高熱對正常細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞均有殺傷作用，而乏氧的腫瘤細(xì)胞比正常組織細(xì)胞對熱更敏感，且不同腫瘤對高溫的作用反應(yīng)差別很大。因此有必要了解不同腫瘤細(xì)胞對加熱的敏感程度，以提高熱療的療效，而同時(shí)也能盡量避免正常組織的損傷。腫瘤細(xì)胞通過細(xì)胞膜的跨膜物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)功能，保持著細(xì)胞內(nèi)、外液體離子濃度、滲透壓的平衡。當(dāng)外界滲透壓改變，必然將引

4、起細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的改變，而由此導(dǎo)致細(xì)胞功能的改變。當(dāng)此種改變尚可為細(xì)胞所代償，則細(xì)胞尚可生存；失代償，則細(xì)胞最終死亡。 目的本實(shí)驗(yàn)基于癌細(xì)胞自身乏氧環(huán)境的特點(diǎn)，以及在不同密度環(huán)境、溫度下易受損傷的原理，探討不同溫度、不同滲透壓溶液以及不同作用時(shí)間對離體人肝癌細(xì)胞系HepG2的殺傷效應(yīng)。以期尋求一種確實(shí)可靠、操作簡便的術(shù)中殺滅FCC的方法，在預(yù)防HCC術(shù)后復(fù)發(fā)中發(fā)揮積極的作用。 材料與方法人肝癌細(xì)胞系HepG2，用接種傳代第三

5、日(即傳代后的細(xì)胞處于指數(shù)增生期時(shí))的細(xì)胞收集做實(shí)驗(yàn)。采用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)析因?qū)嶒?yàn)：根據(jù)臨床使用的經(jīng)驗(yàn)，將“溫度”按每3度設(shè)置一個(gè)檢測點(diǎn)，即37℃、40℃、43℃、46℃四個(gè)點(diǎn)；“時(shí)間”按5分鐘、15分鐘、30分鐘、60分鐘劃分；滲透壓則根據(jù)臨床工作中常見溶液配置，故設(shè)置無菌蒸餾水、0.45％無菌鹽水(低滲組)、0.9％無菌生理鹽水(等滲組)、3％無菌鹽水(高滲組)、PBS溶液各組。 實(shí)驗(yàn)組：按完全隨機(jī)設(shè)計(jì)，根據(jù)排列組合共有4×5×

6、4=80組，每組6例(n=6) 對照組：包括陰性對照和空白對照，即以未經(jīng)處理的細(xì)胞溶液為陰性對照，以不含細(xì)胞的全培養(yǎng)液為空白對照，每組12例。 應(yīng)用MTT法測定細(xì)胞指數(shù)。細(xì)胞指數(shù)(CI)=1-(實(shí)驗(yàn)孔的平均OD值-空白組平均OD值)/(陰性對照孔的平均OD值-空白組平均OD值) 結(jié)果：(1)單獨(dú)效應(yīng)分析：對于細(xì)胞指數(shù)，不同溫度間、不同滲透壓溶液間、不同作用時(shí)間之間的差異均有顯著性意義。而在“溫度”、“時(shí)間”和“溶

7、液滲透壓”三個(gè)因素中，以“時(shí)間”因素影響最大。 (2)多重比較分析：在溫度軸上，除了40℃和43℃之間，其余各溫度間差異均具有顯著意義；在溶液滲透壓上，除了0.45％和3％的氯化鈉溶液之間，其余各溶液間差異均有顯著意義；在時(shí)間軸上，不同作用時(shí)間對細(xì)胞指數(shù)的影響都具有顯著意義，且細(xì)胞指數(shù)隨浸泡時(shí)間增加而上升。因此，在排除了交互效應(yīng)的基礎(chǔ)上，三種因素的最佳組合，為“46℃-無菌蒸餾水-作用60分鐘”試驗(yàn)組——即46攝氏度時(shí)用水處理1

8、個(gè)小時(shí)達(dá)到了本次試驗(yàn)中引起調(diào)亡的最佳條件。 (3)交互效應(yīng)分析：溫度與溶液滲透壓、溫度與作用時(shí)間、溶液滲透壓與作用時(shí)間、以及這三個(gè)自變量之間都對細(xì)胞指數(shù)的影響具有交互作用。因此，可認(rèn)為在15-30分鐘的作用時(shí)間內(nèi)，43℃和蒸餾水的組合能穩(wěn)定地引起最高凋亡指數(shù)。 結(jié)論：1.溫度、作用時(shí)間和溶液濃度三個(gè)因素對體外肝癌細(xì)胞系HepG2的細(xì)胞指數(shù)均有顯著的作用，且三者之間以及其中兩兩之間都存在著顯著的交互作用； 2.溫度