PAMs對人肝癌HepG2細(xì)胞的殺傷及抗癌分子作用機(jī)理初步研究.pdf

1、根據(jù)最新的數(shù)據(jù)統(tǒng)計顯示，惡性腫瘤目前已成為全球范圍內(nèi)致死率排名第二的疾病，每年新增的病例數(shù)量都呈現(xiàn)上升趨勢。尋求安全、有效、無或低毒副作用的預(yù)防、治療手段和抗癌藥物成為該領(lǐng)域生命科學(xué)與醫(yī)藥科學(xué)工作者的重要追求。在抗腫瘤新藥的研發(fā)領(lǐng)域中，無需手術(shù)、副作用小等優(yōu)點(diǎn)讓天然植物藥物成為新的熱點(diǎn)。天然植物抗菌液(PAMs)是由云南民族醫(yī)藥研究所有限公司研發(fā)的一種新型民族醫(yī)藥復(fù)方制劑，經(jīng)用乙醇提取紅花、蕓香草、刺天茄、紫草等多種天然藥用植物的有效成

2、分精制而成。民間體驗和前期研究證實，PAMs具有抗菌消炎、傷口愈合、潰瘍修復(fù)等多種功效，體外研究還發(fā)現(xiàn)，PAMs對白血病、肝癌、乳腺癌、宮頸癌等多種惡性腫瘤細(xì)胞株均有強(qiáng)的殺傷作用，揭示PAMs作為一種傳統(tǒng)民族醫(yī)藥在抗癌領(lǐng)域的潛力和前景。作為一種含有多種植物成分的復(fù)方制劑，PAMs的抗癌作用及分子機(jī)理尚需探究。本論文中，以人源肝癌HepG2細(xì)胞為主要研究對象，探究PAMs在體內(nèi)外對其的抑制作用及分子作用機(jī)理。同時初步探究了PAMs對乳腺癌

3、細(xì)胞MCF-7、MDA-MB-231的體外殺傷作用。
　　首先，以HepG2、MCF-7、MDA-MB-231三株惡性腫瘤細(xì)胞為對象，初步研究了PAMs對他們的殺傷作用。形態(tài)學(xué)觀察與CCK8法確定了PAMs對三種細(xì)胞的增殖均具有殺傷作用，且殺傷效果與藥物濃度、作用時間呈依賴性。細(xì)胞劃痕實驗、Transwell實驗結(jié)果相互印證了PAMs可以有效抑制這三種細(xì)胞的體外遷移。隨后，以HepG2細(xì)胞為研究對象，Western Blot法檢測

4、到與細(xì)胞凋亡有關(guān)的FoxM1蛋白表達(dá)量的下調(diào)，抑癌基因p53蛋白表達(dá)量的上調(diào)，與預(yù)期結(jié)果一致。
　　然后，選用了BALB/c(nu/nu)裸鼠建立體內(nèi)HepG2移植瘤模型，共設(shè)定陰性對照組(Alcohol control組)、藥物組（PAMs組）、提前給藥組（Pre-PAMs組）、陽性對照組（5-Fu組）四組。裸鼠左腋皮下注射HepG2細(xì)胞后100％成瘤。接種細(xì)胞后三周處死裸鼠，剝離出裸鼠腫瘤組織，解剖觀察其臟器生長情況，稱量瘤重

5、、肝重量、脾臟重量，計算抑瘤率、肝指數(shù)、脾臟指數(shù)。HE染色觀察腫瘤病理變化，Tunel法觀察腫瘤細(xì)胞凋亡情況，免疫組化測定不同實驗組移植瘤組織細(xì)胞中caspase3、caspase9蛋白表達(dá)量的變化，ELISA測定裸鼠經(jīng)過藥物治療后血清中IL-12、TNF-α、VEGF的變化。FQ-PCR、Western Blot從mRNA水平和蛋白水平探究PAMs對肝癌的抑制作用途徑。結(jié)果顯示，與陰性對照組相比，PAMs組、Pre-PAMs組、5-F

6、u組的抑瘤率分別為55.13％、57.43％、56.58％，呈現(xiàn)出極顯著的統(tǒng)計學(xué)差異（**P＜0.01）。5-FU組裸鼠的肝指數(shù)、脾臟指數(shù)均出現(xiàn)異常，與對照組呈現(xiàn)明顯的差異(*P＜0.05)，而PAMs組和Pre-PAMs組則與對照組無統(tǒng)計學(xué)差異，揭示PAMs對裸鼠體液免疫系統(tǒng)無傷害，與陽性藥物相比，毒副作用較小。PAMs組與Pre-PAMs組中的caspase3、caspase9蛋白表達(dá)量均有明顯上調(diào)，MMP-2、FoxM1、p53的

7、mRNA表達(dá)量與蛋白表達(dá)量均出現(xiàn)下調(diào)。而兩組VEGF的含量出現(xiàn)了一定程度的下降，與空白組相比具有極顯著性差異（**P＜0.01），IL-12、TNF-α出現(xiàn)了一定程度的上升，與空白組相比差異顯著(*P＜0.05)，以上結(jié)果也與抗菌液對肝癌腫瘤生長的抑制作用預(yù)期一致。
　　主要結(jié)論:PAMs在體內(nèi)外均能抑制肝癌HepG2細(xì)胞的生長，通過實驗探究，推測PAMs可通過不同層次的作用于HepG2細(xì)胞。一方面它可以通過下調(diào)FoxM1轉(zhuǎn)錄因子