γ射線對人肝癌細胞SMMC7721和HepG2滅活效果的研究.pdf

1、目的：肝細胞肝癌在腫瘤導致死亡的疾病中排名世界第三，特別是在發(fā)展中國家，發(fā)病率還呈上升的趨勢。手術治療是根治肝癌的最有效的手段，但是僅有10％-30%的患者在診斷出肝癌時有手術指征。肝癌患者進行肝切除術或者肝移植手術時常常會伴隨著大量失血，往往需要輸血，異體輸血存在著很多弊端，比如不良輸血反應，免疫抑制以及疾病傳播等，而特別是對于腫瘤患者來講，可能還會引起腫瘤的復發(fā)，因此推薦肝癌患者進行自體輸血。但是肝癌患者自體輸血一直以來又存在著爭議

2、，有學者擔心血中可能存在的肝癌細胞有可能會引起腫瘤的血行轉(zhuǎn)移。故本實驗通過研究γ射線對人肝癌細胞的增殖、遷移、侵襲、凋亡的影響，來探究γ射線對肝癌患者的自體血液中殘留的腫瘤細胞的滅活效果，尋找合適的輻照劑量，為肝癌患者的自體輸血的安全應用提供依據(jù)。
　　方法：1）人肝癌細胞株SMMC7721和 HepG2的體外培養(yǎng)。2）用不同劑量的γ射線處理 HCC（Hepatoma carcinoma cell）后，用CCK8(cell cou

3、nting kit-8)實驗檢測細胞的增殖能力，吸光度值的大小可以反應活細胞的相對數(shù)量；劃痕實驗檢測細胞的遷移能力，細胞移動的距離可以代表遷移能力；Transwell實驗以及MPP-9蛋白表達量檢測來反應細胞的侵襲能力，穿過的細胞越多，MMP-9蛋白的表達越多，細胞的侵襲能力越強；annexin V/PI染色（流式細胞術）和P53凋亡蛋白的表達量測定來檢測細胞的凋亡情況。3）用SPSS17.0軟件統(tǒng)計分析實驗結(jié)果，P<0.05表示差異有

4、統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)果：1）γ射線處理細胞后，細胞失去了正常形態(tài)，出現(xiàn)了細胞變形，漂浮，細胞膜不完整，胞質(zhì)內(nèi)有空泡，細胞碎裂等一系列變化；2）γ射線處理后24h，48h，72h，細胞的增殖能力都明顯受到抑制，細胞活力跟培養(yǎng)時間和γ射線劑量成反比，隨著培養(yǎng)時間和劑量增加，細胞活力降低，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）；3）γ射線對細胞的遷移能力有抑制作用，24h劃痕實驗結(jié)果顯示，隨著劑量增加，細胞遷移的距離減小，差異有統(tǒng)計學意義（P

5、<0.01）；4）γ射線對細胞的侵襲能力有抑制作用，隨著劑量增加，穿過小室的細胞數(shù)量逐漸減小，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.01）；Western Blot法結(jié)果顯示，輻照后， MPP-9蛋白的表達量降低（P<0.01）；5）γ射線會抑制細胞的克隆形成，20Gy開始，細胞沒有克隆形成。6）流式凋亡檢測顯示，細胞早期凋亡率隨著γ射線的劑量增加而增加（P<0.01），Western Blot法結(jié)果顯示，γ射線處理HCC后，P53凋亡蛋白的表達