γ射線對(duì)人肝癌細(xì)胞SMMC7721和HepG2滅活效果的研究.pdf

1、目的：肝細(xì)胞肝癌在腫瘤導(dǎo)致死亡的疾病中排名世界第三，特別是在發(fā)展中國(guó)家，發(fā)病率還呈上升的趨勢(shì)。手術(shù)治療是根治肝癌的最有效的手段，但是僅有10％-30%的患者在診斷出肝癌時(shí)有手術(shù)指征。肝癌患者進(jìn)行肝切除術(shù)或者肝移植手術(shù)時(shí)常常會(huì)伴隨著大量失血，往往需要輸血，異體輸血存在著很多弊端，比如不良輸血反應(yīng)，免疫抑制以及疾病傳播等，而特別是對(duì)于腫瘤患者來(lái)講，可能還會(huì)引起腫瘤的復(fù)發(fā)，因此推薦肝癌患者進(jìn)行自體輸血。但是肝癌患者自體輸血一直以來(lái)又存在著爭(zhēng)議

2、，有學(xué)者擔(dān)心血中可能存在的肝癌細(xì)胞有可能會(huì)引起腫瘤的血行轉(zhuǎn)移。故本實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究γ射線對(duì)人肝癌細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲、凋亡的影響，來(lái)探究γ射線對(duì)肝癌患者的自體血液中殘留的腫瘤細(xì)胞的滅活效果，尋找合適的輻照劑量，為肝癌患者的自體輸血的安全應(yīng)用提供依據(jù)。
　　方法：1）人肝癌細(xì)胞株SMMC7721和 HepG2的體外培養(yǎng)。2）用不同劑量的γ射線處理 HCC（Hepatoma carcinoma cell）后，用CCK8(cell cou

3、nting kit-8)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的增殖能力，吸光度值的大小可以反應(yīng)活細(xì)胞的相對(duì)數(shù)量；劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的遷移能力，細(xì)胞移動(dòng)的距離可以代表遷移能力；Transwell實(shí)驗(yàn)以及MPP-9蛋白表達(dá)量檢測(cè)來(lái)反應(yīng)細(xì)胞的侵襲能力，穿過(guò)的細(xì)胞越多，MMP-9蛋白的表達(dá)越多，細(xì)胞的侵襲能力越強(qiáng)；annexin V/PI染色（流式細(xì)胞術(shù)）和P53凋亡蛋白的表達(dá)量測(cè)定來(lái)檢測(cè)細(xì)胞的凋亡情況。3）用SPSS17.0軟件統(tǒng)計(jì)分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果，P<0.05表示差異有

4、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：1）γ射線處理細(xì)胞后，細(xì)胞失去了正常形態(tài)，出現(xiàn)了細(xì)胞變形，漂浮，細(xì)胞膜不完整，胞質(zhì)內(nèi)有空泡，細(xì)胞碎裂等一系列變化；2）γ射線處理后24h，48h，72h，細(xì)胞的增殖能力都明顯受到抑制，細(xì)胞活力跟培養(yǎng)時(shí)間和γ射線劑量成反比，隨著培養(yǎng)時(shí)間和劑量增加，細(xì)胞活力降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；3）γ射線對(duì)細(xì)胞的遷移能力有抑制作用，24h劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，隨著劑量增加，細(xì)胞遷移的距離減小，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

5、<0.01）；4）γ射線對(duì)細(xì)胞的侵襲能力有抑制作用，隨著劑量增加，穿過(guò)小室的細(xì)胞數(shù)量逐漸減小，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；Western Blot法結(jié)果顯示，輻照后， MPP-9蛋白的表達(dá)量降低（P<0.01）；5）γ射線會(huì)抑制細(xì)胞的克隆形成，20Gy開(kāi)始，細(xì)胞沒(méi)有克隆形成。6）流式凋亡檢測(cè)顯示，細(xì)胞早期凋亡率隨著γ射線的劑量增加而增加（P<0.01），Western Blot法結(jié)果顯示，γ射線處理HCC后，P53凋亡蛋白的表達(dá)