VEGF-B基因靶向siRNA對肝癌細胞裸鼠皮下種植瘤VEGF-B蛋白表達的影響.pdf

1、學位論文使用授權及知識產權歸屬承諾本學位論文在導師(或指導小組)的指導下，由本人獨立完成。本學位論文研究所獲得的研究成果，其知識產權歸河北醫(yī)科大學所有。河北醫(yī)科大學有權對本學位論文進行交流、公開和使用。凡發(fā)表與學位論文主要內容相關的論文，第一署名為單位河北醫(yī)科大學，試驗材料、原始數據、申報的專利等知識產權均歸河北醫(yī)科大學所有。否則，承擔相應法律責任。研究生簽名：相親l氫導師簽章：二級學院領導蓋章：、1●沙J弓篾。多月矽日、?！凇?、：氣：

2、、j“≈i：，河北醫(yī)科大學研究生學位論文獨創(chuàng)性聲明成果，指導教師對此進行了審定。本論文由本人獨立撰寫：文責自負。研究生簽名：囪麥遢導師簽章／彳多勿緲伽J弓華弓月多衫日中文摘要VEGFB基因靶向siRNA對肝癌細胞裸鼠皮下種植瘤VEGF—B蛋白表達的影響摘要目的：原發(fā)性肝癌(以下簡稱肝癌)為常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病隱匿，進展速度快，預后差。目前對于肝癌的治療主要是以手術為主的綜合治療，包括：手術切除、射頻消融、微波固化、化療栓塞(TACE

3、)、放射治療、生物免疫治療等，手術切除為目前最主要、最有效的方法，但患者術后5年生存率低，主要是因為患者術后腫瘤的復發(fā)及轉移。腫瘤的生長及轉移依賴于新生血管的形成，血管的新生是一個多因素調節(jié)的過程，血管內皮生長因子(VEGF)是促進血管形成的重要調節(jié)因子之一，VEGF除具有促進血管形成作用外，還具有促進淋巴管形成、調節(jié)脂質代謝、保護及營養(yǎng)神經等作用，并且與腫瘤的發(fā)生、進展密切相關?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)VEGF家族共有7個成員，VEGFB為其中重要的

4、一員，我們前期的研究發(fā)現(xiàn)肝癌的發(fā)生、發(fā)展與VEGFB密切相關。RNA干擾(RNAinterference，RNAi)為轉錄后的基因沉默，可以實現(xiàn)對目的基因的高特異、高效沉默，小干擾RNA(siRNA)是RNA干擾中主要介導因子。本實驗從人類VEGFB基因中選取3個靶點，利用RNA干擾技術體外構建3個VEGFB基因靶向siRNA，轉染人肝癌細胞HepG2細胞并建立裸鼠皮下種植瘤模型，觀察抑制VEGFB基因后對肝癌細胞裸鼠皮下種植瘤的影響，

5、從而為肝癌的基因治療提供新的靶點及理論依據。方法：從人VEGF—B基因中選取3個靶點，利用RNA干擾技術體外構建3個靶向siRNA。常規(guī)培養(yǎng)人肝癌細胞HepG2細胞，借助質粒載體將陰性空白對照質粒及3個陽性VEGF—B基因靶向siRNA質粒轉染入HepG2細胞(轉染后分別命名為：Bt0，Btl，Bt2，Bt3)，轉染48小時后觀察轉染效率，用blasticidin穩(wěn)定篩選并培養(yǎng)擴增。將24只裸鼠隨機分成4組，并將轉染篩選后的4組細胞種植