以CD146為靶點(diǎn)的胃癌早期診斷多功能納米探針的相關(guān)研究.pdf

1、研究證明，膜蛋白CD146可以作為胃癌的早期診斷標(biāo)志物。早在2012年，在美國PNAS雜志一篇名為“CD146，三陰乳腺癌上皮-基質(zhì)轉(zhuǎn)化的啟動(dòng)因子”對CD146蛋白的研究推向了另一個(gè)高峰。這篇論文指出，CD146啟動(dòng)了上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial-Mesenchymal Transition，EMT)機(jī)制，加速了腫瘤的轉(zhuǎn)移形成，是一新的診斷以EMT轉(zhuǎn)移機(jī)制為基礎(chǔ)的惡性腫瘤的標(biāo)志物。但是這篇文章中涉及的抗CD146單克隆抗體不能直

2、接識別三陰乳腺癌的腫瘤細(xì)胞株MB-231，只能識別外在轉(zhuǎn)入質(zhì)粒后表達(dá)CD146的陰性細(xì)胞株MCF-7。這樣的抗體是很難識別活體內(nèi)腫瘤天然表達(dá)的CD146，更難以達(dá)到對活體腫瘤的早期診斷。因此我們設(shè)想以真核表達(dá)的CD146蛋白為抗原，免疫小鼠獲得抗CD146單克隆抗體，以磁性納米材料為載體，研發(fā)具有自主知識產(chǎn)權(quán)的能識別活體腫瘤的靶向探針，實(shí)現(xiàn)惡性腫瘤的早期診斷與靶向治療。
　　主要的研究內(nèi)容和結(jié)果:
　　1.以真核CD146蛋

3、白免疫小鼠獲得高效抗CD146單克隆抗體;
　　我們通過購買的真核CD146蛋白免疫小鼠，并以此作為篩選源，完成四次clone化和Elisa體外篩選實(shí)驗(yàn)后獲得五株抗CD146單克隆抗體，經(jīng)過FACS，confocal等一些列體外鑒定實(shí)驗(yàn)，確定第五株為靶向性最好的一株，并命名為YY146。
　　2.磁性納米材料的制備與鑒定;
　　采用微乳液法，在表面活性劑NP-5與環(huán)己烷的體系中加入10-15nm的四氧化三鐵超順磁納米顆

4、粒，再體系中加入30％氨水，使體系呈弱堿性，再往體系中引入正硅酸乙酯TEOS以形成二氧化硅包裹的四氧化三鐵超順磁顆粒，接著構(gòu)建具有靶向CD146特性的磁性二氧化硅納米顆粒，并體外通過激光共聚焦顯微鏡觀察、流式細(xì)胞術(shù)等方法檢測分子探針的活性、特異性，為下一步分析該分子探針在MR/NIR活體成像的研究奠定基礎(chǔ)。
　　3.靶向CD146磁性納米顆粒的體外初步研究;
　　經(jīng)過流式細(xì)胞術(shù)、免疫熒光檢測，透射顯微鏡掃描等技術(shù)檢測證實(shí)所構(gòu)

5、建的分子探針可特異地與腫瘤細(xì)胞CD146抗原相結(jié)合，并保持良好的生物學(xué)活性;
　　4.靶向CD146磁性納米顆粒的活體內(nèi)初步研究;
　　體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)在裸鼠尾靜脈注射探針4h后的MR掃描可以顯著降低腫瘤組織在T2W1的信號，近紅外顯影與6小時(shí)后能靶向顯影腫瘤，說明構(gòu)建的探針在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中獲得不錯(cuò)的靶向性，有望其作為一種新的分子影像學(xué)診斷技術(shù)應(yīng)用于臨床進(jìn)行腫瘤早期或轉(zhuǎn)移的診斷。
　　結(jié)論:
　　本研究構(gòu)建的分子探針