THAP11調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄的分子機制研究.pdf

1、THAP11屬于新發(fā)現(xiàn)的THAP蛋白質(zhì)家族成員。該蛋白家族是一類鋅離子依賴的DNA結(jié)合蛋白質(zhì)，廣泛參與細胞增殖、凋亡調(diào)控，并可能與染色體修飾與重構(gòu)相關(guān)。前期研究表明THAP11可通過直接結(jié)合c-Myc啟動子區(qū)抑制c-Myc表達，進而抑制細胞增殖。此外，THAP11還可調(diào)控胚胎干細胞(ES)的自我更新和增殖。但目前對其作用機制尚無深入研究。
　　 本研究利用哺乳動物雙雜交系統(tǒng)，發(fā)現(xiàn)THAP11同時具有轉(zhuǎn)錄激活和轉(zhuǎn)錄抑制活性，并通過

2、系列缺失，確定了其功能結(jié)構(gòu)域，N端82個氨基酸區(qū)具有轉(zhuǎn)錄抑制活性，C端185個氨基酸區(qū)具有轉(zhuǎn)錄激活活性。THAP11發(fā)揮轉(zhuǎn)錄抑制活性與染色體修飾相關(guān)因子關(guān)系。進一步利用酵母雙雜交技術(shù)，從成人肝臟cDNA文庫中篩選到CtBP1可與THAP11發(fā)生相互作用。利用免疫共沉淀技術(shù)，我們證實了THAP11與CtBP1存在相互作用，并確定了兩種相互作用結(jié)構(gòu)域。鑒于該蛋白可通過直接的蛋白質(zhì)相互作用參與轉(zhuǎn)錄因子發(fā)揮轉(zhuǎn)錄抑制的過程，THAP11與CtBP

3、1相互作用可能是THAP11發(fā)揮轉(zhuǎn)錄抑制活性的方式。為進一步探討THAP11調(diào)控基因表達的分子機制，對全基因組進行THAP11潛在結(jié)合位點的檢索，發(fā)現(xiàn)Oct4啟動子含有THAP11潛在的結(jié)合位點。分離人Oct4啟動子區(qū)，構(gòu)建報告基因載體，發(fā)現(xiàn)THAP11可激活Oct4啟動子轉(zhuǎn)錄，這種激活活性依賴于其C端轉(zhuǎn)錄激活區(qū)，而與其DNA結(jié)合能力無關(guān)。EMSA實驗證實THAP11能夠結(jié)合預(yù)測的結(jié)合位點結(jié)合，但系列缺失突變實驗證實THAP11對Oct