FGF21基因及DsbA-L基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　FGF21是一種參與代謝調(diào)節(jié)的細(xì)胞因子。DsbA-L是一種與脂聯(lián)素多聚體形成有關(guān)的重要調(diào)節(jié)蛋白，兩者在增加胰島素的敏感性和增加能量代謝方面具有很多有益的作用。最近研究發(fā)現(xiàn)FGF21能夠上調(diào)DsbA-L的表達(dá)，F(xiàn)GF21和DsbA-L在促進(jìn)脂聯(lián)素的合成方面存在較多的聯(lián)系。本課題擬探究FGF21和DsbA-L的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制。
　　方法：
　　通過構(gòu)建兩個基因的啟動子熒光素酶報告質(zhì)粒及其5′端系列缺失質(zhì)粒，分析啟

2、動子活性。利用軟件MAPPER預(yù)測關(guān)鍵的調(diào)控序列，通過實驗驗證該區(qū)域存在的關(guān)鍵的轉(zhuǎn)錄因子，并初步分析了肥胖狀態(tài)下相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控作用。
　　結(jié)果：
　　本研究發(fā)現(xiàn)小鼠FGF21基因最小啟動子區(qū)位于-60到-20bp（相對于TSS）；軟件預(yù)測該區(qū)域存在兩個潛在的Sp1結(jié)合位點。點突變分析表明，位于-46到-38bp處的Sp1結(jié)合位點在調(diào)控FGF21的表達(dá)中起主要作用；EMSA和ChIP分別從體外及體內(nèi)水平驗證Sp1能夠特異結(jié)

3、合到FGF21啟動子區(qū)；在高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖小鼠脂肪組織中，Sp1的表達(dá)以及Sp1與FGF21啟動子區(qū)的結(jié)合顯著增加。
　　本研究成功構(gòu)建人DsbA-L啟動子報告基因質(zhì)粒；系列缺失分析表明-1288~-2114bp區(qū)域是影響轉(zhuǎn)錄活性的關(guān)鍵堿基序列；MAPPER軟件預(yù)測此區(qū)域存在一些與脂肪分化與發(fā)育有關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子；比較相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子在肥胖患者和正常人皮下脂肪組織中的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)NF-кB和FOXO1在肥胖患者中表達(dá)增加，推測NF-к