2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、目的:
   研究人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞在FGF21刺激下,動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)因子PON1、ICAM1、VCAM1表達(dá)量的變化。脂肪細(xì)胞在FGF21刺激下,葡萄糖攝取量變化情況以及動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)因子PON1表達(dá)量的變化;研究不同處理組C57BL6小鼠和apoE-/-小鼠各組織中FGF21以及動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)因子PON1表達(dá)量的變化。從而初步探討FGF21對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的影響及其作用機(jī)制。
   方法:
   1.細(xì)

2、胞實(shí)驗(yàn)中(1)不同濃度FGF21作用于HUVECs,酚-氯仿法提取RNA,逆轉(zhuǎn)成cDNA,擴(kuò)增后,加入PON1、ICAM1、VCAM1引物進(jìn)行real-timePCR,提蛋檢測(cè)PON1表達(dá)水平。同一濃度FGF21不同時(shí)間作用HUVECs,檢測(cè)PON1的mRNA表達(dá)量變化。(2)用不同濃度FGF21刺激HUVECs,作用15min后,提取細(xì)胞蛋白,Westernblot檢測(cè)P-Akt,P-Erk1/2的表達(dá)水平。(3)將3T3-L1細(xì)胞分

3、化為脂肪細(xì)胞,油紅染色驗(yàn)證,用FGF21刺激,不同時(shí)間點(diǎn)分別取培養(yǎng)基測(cè)定葡萄糖攝取量。24h后收細(xì)胞,real-timePCR檢測(cè)PON1表達(dá)量。
   2.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中,雄性C57B6小鼠11只以及apoE-/-小鼠41只,體重25-30g,10-14w。C57B6小鼠給予正常食物(NN,n=11),將apoE-/-小鼠隨機(jī)分為正常飲食組(NF,n=9),高脂飲食組(HF,n=32),一個(gè)月高脂模型造成,隨機(jī)選取12只給予普伐他

4、汀,即給藥組(HF+P,n=12),用量為80μg/g/day,給藥二個(gè)月。兩個(gè)月后停止給予高脂食物,繼續(xù)給藥1個(gè)月后,眼眶放血處死,液氮凍存或多聚甲醛固定心、肝、脾、腎等臟器以及主動(dòng)脈。用Elisa測(cè)定血清FGF21的表達(dá)情況。主動(dòng)脈進(jìn)行HE染色,光鏡觀察AS形成情況。主動(dòng)脈進(jìn)行油紅染色,觀察不同組主動(dòng)脈脂肪組織的差別,判斷造模是否成功。免疫組化法觀察FGF21在不同組主動(dòng)脈表達(dá)量的差別。主動(dòng)脈、肝、腎提RNA,real-timePC

5、R檢測(cè)FGF21、PON1的水平;提蛋白,用Westernblot檢測(cè)不同組FGF21、PON1表達(dá)量的差別。
   結(jié)果:
   1.細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中(1)隨著FGF21作用時(shí)間延長(zhǎng),PON1的mRNA表達(dá)量也增加。ICAM1、VCAM1的mRNA表達(dá)量在不同F(xiàn)GF21濃度時(shí)均低于對(duì)照組。HUVECs經(jīng)不同濃度FGF21刺激12h后,PON1的mRNA表達(dá)量及蛋白表達(dá)量高于對(duì)照組,且呈劑量依賴(lài)性。(2)HUVECs經(jīng)不同濃度

6、FGF21刺激后,P-Akt和P-Erk1/2蛋白表達(dá)量隨著FGF21濃度的升高而增加。(3)脂肪細(xì)胞經(jīng)油紅染色證明分化成功;經(jīng)不同濃度FGF21刺激24h后,葡萄糖攝取量變化呈劑量依賴(lài)性;兩種濃度FGF21刺激脂肪細(xì)胞24h后,PON1的mRNA表達(dá)量及蛋白表達(dá)量均高于對(duì)照,但二者差別不明顯。
   2.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中(1)Elisa檢測(cè),高脂食物apoE-/-小鼠血清FGF21的表達(dá)水平高于正常食物apoE-/-小鼠,給藥普伐他

7、汀后,F(xiàn)GF21的水平又降低。(2)光鏡下NN主動(dòng)脈平滑肌排列整齊規(guī)則,管腔內(nèi)皮光滑,無(wú)增生。HF組平滑肌排列顯著紊亂,中膜明顯不規(guī)則增厚,內(nèi)膜有泡沫細(xì)胞以及斑塊形成,鈣化嚴(yán)重且廣泛。HF+P組主動(dòng)脈病變較HF組明顯減輕,平滑肌排列稍紊亂,中膜有灶性鈣化。(3)油紅染色結(jié)果可見(jiàn),HF組小鼠的主動(dòng)脈的脂肪細(xì)胞明顯多于NF,且二者均多于NN組。(4)免疫組化顯示,F(xiàn)GF21在HF組主動(dòng)脈的表達(dá)量多于NF組,給藥后,HF+P組主動(dòng)脈的FGF2

8、1的表達(dá)量明顯降低。(5)定量PCR結(jié)果顯示,F(xiàn)GF21mRNA在正常C57BL6小鼠的主動(dòng)脈、肝、腎、脾的表達(dá)水平均高于apoE-/-小鼠。HF組小鼠肝FGF21的mRNA表達(dá)量高于NF組小鼠,給藥普伐他汀后明顯降低,HF組小鼠腎FGF21的mRNA表達(dá)量高于NF組小鼠,給藥后沒(méi)有降低。(6)Westernblot結(jié)果顯示,HF組小鼠肝FGF21、PON1的mRNA表達(dá)量高于NF組小鼠肝中的表達(dá),且二者均高于NN,給藥后表達(dá)量又降低。

9、
   結(jié)論:
   1、HUVECs中,F(xiàn)GF21上調(diào)抗動(dòng)脈粥樣硬化因子PON1,下調(diào)致動(dòng)脈粥樣硬化因子ICAM1、VCAM1的表達(dá)量。這些影響可能與Akt和Erk1/2通路有一定的關(guān)聯(lián)。FGF21可以提高脂肪細(xì)胞對(duì)葡萄糖的攝取量,隨著FGF21濃度的增加而增加,同時(shí)可以提高脂肪細(xì)胞中抗動(dòng)脈粥樣硬化因子PON1的表達(dá)量。
   2、動(dòng)脈粥樣硬化小鼠的血清、主動(dòng)脈、肝及腎的FGF21表達(dá)量都比正常小鼠顯著增加,在

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