THAP11基因抑制細(xì)胞增殖及其機(jī)制的研究.pdf

1、THAPll屬于新發(fā)現(xiàn)的THAP蛋白家族。該家族因含有與P元件轉(zhuǎn)座酶DBD高度同源的THAP結(jié)構(gòu)域而得名。研究表明這是一類(lèi)鋅離子依賴的DNA結(jié)合蛋白，廣泛參與細(xì)胞增殖、凋亡調(diào)控，并可能與染色體修飾／重構(gòu)相關(guān)。 THAP11表達(dá)廣泛，無(wú)明確組織特異性。cDNA微陣列芯片檢測(cè)顯示，與相應(yīng)癌旁組織相比，THAPll在多種腫瘤組織中表達(dá)明顯下調(diào)；采用可誘導(dǎo)表達(dá)THAPll的HEK293穩(wěn)定細(xì)胞株發(fā)現(xiàn)：誘導(dǎo)THAPll表達(dá)可抑制HEK29

2、3細(xì)胞增殖。此外，THAPll表達(dá)也能明顯抑制7721、HeLa和MCF-7細(xì)胞的集落形成能力，說(shuō)明THAP11是一個(gè)生長(zhǎng)抑制基因。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)THAP11通過(guò)抑制c-myc啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄活性，引起c-myc表達(dá)下調(diào)，以及ODC、Nucleolin等c-myc靶基因表達(dá)下調(diào)，進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)抑制。轉(zhuǎn)染c-myc表達(dá)質(zhì)粒，恢復(fù)c-myc表達(dá)，能使THAP11引發(fā)的集落形成抑制現(xiàn)象得到顯著緩解，表明負(fù)調(diào)控c-myc轉(zhuǎn)錄是THAPll抑制增殖

3、的重要原因。 鑒于c-myc在細(xì)胞增殖、分化以及細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過(guò)程中的重要地位，研究了THAPll抑制c-myc轉(zhuǎn)錄的機(jī)制。通過(guò)構(gòu)建c-myc啟動(dòng)子缺失突變的報(bào)告基因載體，將THAPll實(shí)現(xiàn)調(diào)控的區(qū)域定位在c-mycP2啟動(dòng)子上游-710bp～-484bp處；ChIP實(shí)驗(yàn)證實(shí)THAP11在體內(nèi)能與這一區(qū)域的DNA序列結(jié)合；合成探針并用EMSA實(shí)驗(yàn)確定了THAPll識(shí)別并結(jié)合的特異DNA序列，說(shuō)明THAP11通過(guò)結(jié)合在c-myc啟動(dòng)