細胞核肌動蛋白參與基因轉錄調(diào)控的分子機制研究.pdf

1、肌動蛋白是一類高度保守的蛋白質(zhì)，存在于所有的真核細胞中，參與細胞分裂、運動、遷移、形態(tài)的維持、生長等許多重要生理活動。有研究指出，肌動蛋白也存在于細胞核內(nèi)。但由于肌動蛋白是豐富的胞質(zhì)蛋白，致使這一結論受到質(zhì)疑。后來，依賴生物化學、免疫熒光、免疫電子顯微鏡和激光共聚焦顯微鏡等實驗技術，證明肌動蛋白普遍存在于各類細胞的細胞核中。 雖然肌動蛋白在細胞質(zhì)中的功能已經(jīng)被研究的很透徹，但它在細胞核內(nèi)的功能還不清楚。有實驗指出，肌動蛋白在核

2、運輸方面發(fā)揮作用，可能參與RNA運輸及mRNA加工。肌動蛋白還能與protein4．1共定位，可能參與核組裝過程。此外，肌動蛋白還能與染色質(zhì)改構復合物和乙酰轉移酶復合物相互作用，在染色質(zhì)結構的調(diào)整方面也發(fā)揮重要作用。越來越多的證據(jù)表明肌動蛋白也能參與基因轉錄的調(diào)控。在早期的實驗中，微注射肌動蛋白的抗體或結合蛋白能抑制燈刷染色體的轉錄。肌動蛋白還能與RNA聚合酶Ⅱ共純化，對RNA聚合酶Ⅱ體外的有效轉錄起到作用。最近有實驗指出，肌動蛋白能被

3、募集到基因的啟動子區(qū)，是轉錄前起始復合物的成分。但肌動蛋白在此復合物中的作用還有待于進一步研究。 本文通過實驗證明，RNA解旋酶A是轉錄前起始復合物中能夠與肌動蛋白相互作用的蛋白質(zhì)。我們首先通過免疫共沉淀和免疫熒光標記技術證明RNA解旋酶A在體內(nèi)可以與肌動蛋白相互作用。然后利用GST pull—down實驗證實RNA解旋酶A主要是通過其RGG區(qū)域與肌動蛋白作用，并且這一負顯性突變體能夠抑制RNA聚合酶Ⅱ募集到轉錄前起始復合物中