C57BL-6小鼠形覺剝奪性近視動物模型鞏膜及視網(wǎng)膜甲基化位點的篩選.pdf

1、論文題目：g墨Z墾L么魚塵鼠矍堂剝查鮭塹視邊塑槿型丑腿厘視匭腿里基絲焦點的箍造答辯委員會主席：送陵數(shù)援迢劌醫(yī)型太堂答辯委員會成員：送陵塾援濕叢醫(yī)型太堂遠瞼數(shù)援武這盔堂閨丕丑麴握濕州醫(yī)抖太堂論文答辯日期：至Q!墨生墨旦坌圣旦溫州醫(yī)科大學碩士學位論文C57BL／6小鼠形覺剝奪性近視動物模型鞏膜及視網(wǎng)膜甲基化位點篩選中文摘要目的：利用DNA甲基化芯片篩選C57BL／6小鼠近視動物模型甲基化差異基因，并通過進一步的驗證來闡明形覺剝奪性近視的形成

2、與DNA甲基化的相關(guān)性。方法：采用單眼形覺剝奪(MonocularFormDeprivation，MD)建立C57BL／6小鼠近視動物模型。利用MultiplexMM9CpGPromoter甲基化芯片分別對近視動物模型鞏膜及視網(wǎng)膜整體甲基化水平進行檢測，并利用基因表達譜芯片分析C57Bb／6小鼠形覺剝奪性近視動物模型的基因表達譜系，結(jié)合DNA甲基化芯片和基因表達譜芯片結(jié)果分析形覺剝奪性近視與DNA甲基化相關(guān)的基因。將甲基化芯片篩選出來的

3、差異候選基因通過在線生物分析軟件進行基因功能分析(GeneOntologyAnalysis，GOAnalysis)、信號通路分析(PathwayAnalysis)和基因間相互作用關(guān)系分析(GeneActNetwork)，進一步聚焦到關(guān)鍵基因同時通過硫化測序聚合酶鏈式反應(yīng)(BisulfiteSequencingPCR)和RTPCR(RealtimePCR)驗證候選基因的甲基化水平及mRNA表達水平。結(jié)果；通過鞏膜甲基化芯片篩選出形覺剝奪小

4、鼠處理眼(MDT)與正常對照眼(NC)甲基化差異基因共220個，其中MDT較NC呈現(xiàn)高甲基化基因91個(4136％)，低甲基化基因129個(5864％)。與鞏膜表達譜芯片篩選出共同差異基因(甲基化芯片顯示高甲基化，表達譜芯片顯示低表達)2個(Cbx8，Wipfl)。將鞏膜所有甲基化差異基因進行GO功能分析及Pathway分析聚焦到Calciumsignalingpathway中的Ppp3rl基因及Gnas基因。分析鞏膜甲基化芯片得到MD

5、T與Nc相比甲基化水平差異大且甲基化差異區(qū)域位于基因啟動子及第一外顯子區(qū)基因Lrrc36。視網(wǎng)膜甲基化芯片顯示MDT與Nc差異甲基化基因共488個，其中MDT較NC呈現(xiàn)高甲基化基因299個(6127％)，低甲基化基因189個(3873％)：將視網(wǎng)膜甲基化差異基因進行GO功能分析及Pathway分析后，聚焦到GeneActNetwork中關(guān)鍵基因Pik3r3及MAPKsignalingpathway中的Stmnl基因。分析視網(wǎng)膜甲基化芯片