C57BL-6小鼠形覺(jué)剝奪性近視動(dòng)物模型鞏膜及視網(wǎng)膜甲基化位點(diǎn)的篩選.pdf

1、論文題目：g墨Z墾L么魚(yú)塵鼠矍堂剝查鮭塹視邊塑槿型丑腿厘視匭腿里基絲焦點(diǎn)的箍造答辯委員會(huì)主席：送陵數(shù)援迢劌醫(yī)型太堂答辯委員會(huì)成員：送陵塾援濕叢醫(yī)型太堂遠(yuǎn)瞼數(shù)援武這盔堂閨丕丑麴握濕州醫(yī)抖太堂論文答辯日期：至Q!墨生墨旦坌圣旦溫州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文C57BL／6小鼠形覺(jué)剝奪性近視動(dòng)物模型鞏膜及視網(wǎng)膜甲基化位點(diǎn)篩選中文摘要目的：利用DNA甲基化芯片篩選C57BL／6小鼠近視動(dòng)物模型甲基化差異基因，并通過(guò)進(jìn)一步的驗(yàn)證來(lái)闡明形覺(jué)剝奪性近視的形成

2、與DNA甲基化的相關(guān)性。方法：采用單眼形覺(jué)剝奪(MonocularFormDeprivation，MD)建立C57BL／6小鼠近視動(dòng)物模型。利用MultiplexMM9CpGPromoter甲基化芯片分別對(duì)近視動(dòng)物模型鞏膜及視網(wǎng)膜整體甲基化水平進(jìn)行檢測(cè)，并利用基因表達(dá)譜芯片分析C57Bb／6小鼠形覺(jué)剝奪性近視動(dòng)物模型的基因表達(dá)譜系，結(jié)合DNA甲基化芯片和基因表達(dá)譜芯片結(jié)果分析形覺(jué)剝奪性近視與DNA甲基化相關(guān)的基因。將甲基化芯片篩選出來(lái)的

3、差異候選基因通過(guò)在線生物分析軟件進(jìn)行基因功能分析(GeneOntologyAnalysis，GOAnalysis)、信號(hào)通路分析(PathwayAnalysis)和基因間相互作用關(guān)系分析(GeneActNetwork)，進(jìn)一步聚焦到關(guān)鍵基因同時(shí)通過(guò)硫化測(cè)序聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(BisulfiteSequencingPCR)和RTPCR(RealtimePCR)驗(yàn)證候選基因的甲基化水平及mRNA表達(dá)水平。結(jié)果；通過(guò)鞏膜甲基化芯片篩選出形覺(jué)剝奪小

4、鼠處理眼(MDT)與正常對(duì)照眼(NC)甲基化差異基因共220個(gè)，其中MDT較NC呈現(xiàn)高甲基化基因91個(gè)(4136％)，低甲基化基因129個(gè)(5864％)。與鞏膜表達(dá)譜芯片篩選出共同差異基因(甲基化芯片顯示高甲基化，表達(dá)譜芯片顯示低表達(dá))2個(gè)(Cbx8，Wipfl)。將鞏膜所有甲基化差異基因進(jìn)行GO功能分析及Pathway分析聚焦到Calciumsignalingpathway中的Ppp3rl基因及Gnas基因。分析鞏膜甲基化芯片得到MD

5、T與Nc相比甲基化水平差異大且甲基化差異區(qū)域位于基因啟動(dòng)子及第一外顯子區(qū)基因Lrrc36。視網(wǎng)膜甲基化芯片顯示MDT與Nc差異甲基化基因共488個(gè)，其中MDT較NC呈現(xiàn)高甲基化基因299個(gè)(6127％)，低甲基化基因189個(gè)(3873％)：將視網(wǎng)膜甲基化差異基因進(jìn)行GO功能分析及Pathway分析后，聚焦到GeneActNetwork中關(guān)鍵基因Pik3r3及MAPKsignalingpathway中的Stmnl基因。分析視網(wǎng)膜甲基化芯片