小鼠形覺剝奪性近視中鞏膜后極部巨噬細(xì)胞分泌功能的研究.pdf

1、目的:近視是眼調(diào)節(jié)放松時(shí)，平行光線聚焦在視網(wǎng)膜前的一種屈光狀態(tài)。近視的發(fā)生與多種因素相關(guān)。到目前為止，多數(shù)學(xué)者認(rèn)為近視與鞏膜后極部細(xì)胞外基質(zhì)的重塑有關(guān)，但其具體機(jī)制仍不清楚，本課題組前期發(fā)現(xiàn)形覺剝奪性小鼠近視眼鞏膜后極部巨噬細(xì)胞增多，本研究將觀察近視形成過程中鞏膜后極部巨噬細(xì)胞是否參與了膠原的調(diào)控，從而研究后極部巨噬細(xì)胞對(duì)小鼠屈光發(fā)育及近視的影響。
　　方法:(1)采用出生后18日齡的野生型(wildtype，WT)雄性近交C57

2、BL/6小鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。隨機(jī)將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分成形覺剝奪組(FDM組)和對(duì)照組(Control)，其中形覺剝奪組(FDM組)右眼用不透光的眼罩遮蓋，對(duì)側(cè)眼不做處理。對(duì)照組小鼠不做任何處理。在實(shí)驗(yàn)后2周用紅外偏心驗(yàn)光儀(EIR)檢測眼球屈光度，用光學(xué)斷層掃描儀(OCT)檢測眼球生物學(xué)參數(shù)。(2)免疫熒光雙染的方法檢測鞏膜后極部巨噬細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子的改變:巨噬細(xì)胞包括M1型和M2型兩個(gè)亞型。其中F4/80標(biāo)記總巨噬細(xì)胞（包括M1型和M2型），C

3、D206標(biāo)記M2型巨噬細(xì)胞。分別用以下抗體MMP-2、 MMP-9、 TGF-β1、TGF-β2標(biāo)記基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP-2)、基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)、轉(zhuǎn)化生長因子(TGF-β1，TGF-β2，TGF-β3)。本研究采用冰凍切片免疫熒光雙染的方法及細(xì)胞計(jì)數(shù)的方法，比較實(shí)驗(yàn)眼、對(duì)側(cè)眼以及對(duì)照組鞏膜后極部巨噬細(xì)胞分泌細(xì)胞因子（與膠原調(diào)控相關(guān)）的量。
　　結(jié)果:FDM眼與對(duì)側(cè)眼和對(duì)照組比較，明顯向近視偏移，屈光度有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)

4、差異，形成了明顯的近視（約-2.5D）(p＜0.01)，同時(shí)伴有眼軸的延長，玻璃體腔深度與前房厚度、晶體厚度無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。1.FDM眼鞏膜后極部巨噬細(xì)胞數(shù)量有顯著增加(p＜0.01);鞏膜后極部分泌基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）的細(xì)胞數(shù)量顯著高于對(duì)側(cè)眼和對(duì)照組;分泌MMP-2的巨噬細(xì)胞數(shù)量增加，有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;FDM眼分泌MMP-2的巨噬細(xì)胞占鞏膜后極部總巨噬細(xì)胞的百分比為56.3％，較對(duì)側(cè)眼(20.1％)和對(duì)照組(19.7％)

5、有顯著增高。2.鞏膜后極部基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)的表達(dá)與對(duì)側(cè)組和對(duì)照組相比無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。3.FDM眼鞏膜后極部表達(dá)TGF-β1的細(xì)胞數(shù)量(67.2±26)低于對(duì)側(cè)組(91.4±12.7)和對(duì)照組(103.1±13.4)(p＜0.05)。FDM眼分泌TGF-β1的非巨噬細(xì)胞降低。4.FDM眼鞏膜后極部分泌TGF-β2的細(xì)胞數(shù)量(73.3±9.4)相比對(duì)側(cè)組(110±12.5)和對(duì)照組(119±27.8)增多(p＜0.05)，

6、主要來源于分泌TGF-β2的非巨噬細(xì)胞增多。FDM眼分泌TGF-β2的巨噬細(xì)胞占鞏膜后極部總巨噬細(xì)胞的百分比為27.6％，與對(duì)側(cè)眼(59.1％)和對(duì)照組(50.8％)相比，，降低有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＜0.05)。5.FDM眼鞏膜后極部表達(dá)TGF-β3的細(xì)胞數(shù)量(114.7±23.0)明顯低于對(duì)側(cè)組(88.4±13.4)和對(duì)照組(87±12.6)(p＜0.05)。后極部分泌TGF-β3的非巨噬細(xì)胞數(shù)量下降。分泌TGF-β3的巨噬細(xì)胞占鞏膜

7、后極部總巨噬細(xì)胞的百分比在剝奪眼為54.0％，與對(duì)側(cè)眼(59.4％)和對(duì)照組(50.8％)相比，差異無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.129)。
　　結(jié)論:1.形覺剝奪性近視中，鞏膜后極部巨噬細(xì)胞數(shù)量增多;分泌MMP-2，TGF-β2的細(xì)胞數(shù)增加;分泌TGF-β1，TGF-β3的細(xì)胞減少，MMP-9無變化。
　　2.巨噬細(xì)胞可能通過增加MMP-2分泌參與鞏膜膠原調(diào)控，進(jìn)而間接參與近視。本實(shí)驗(yàn)為巨噬細(xì)胞參與近視的可能提供了部分的依據(jù)。