近視動物模型中鞏膜COL1α2啟動子區(qū)甲基化的初步研究.pdf

1、目的：
　　 1.明確實驗性近視動物模型C57BL/6小鼠鞏膜COL1α2基因mRNA水平的變化;
　　 2.研究形覺剝奪性近視模型C57BL/6小鼠鞏膜COL1α2啟動子區(qū)域CpG島甲基化水平的改變。
　　 方法：
　　 1.建立形覺剝奪性近視模型C57BL/6小鼠:C57BL/6小鼠72只23日齡，隨機分為3組，單眼剝奪組:4周（n=48），形覺剝奪恢復(fù)組:（n=24）對側(cè)眼作自身對照;正常組（n=3

2、6）。實驗前后用紅外偏心驗光儀測量小鼠眼球的屈光度，實驗結(jié)束后提取處理組的實驗眼、處理組的對側(cè)眼和正常對照組的對照眼的鞏膜組織，每兩只鞏膜按照同一處理組內(nèi)隨機合并，提取基因組RNA和DNA，用以后續(xù)實驗。
　　 2.形覺剝奪性C57BL/6小鼠的近視形成期鞏膜COL1α2 mRNA水平上的變化:36只C57BL/6小鼠隨機分成3組:形覺剝奪組:單眼遮蓋4周(n=24);形覺剝奪恢復(fù)組單眼遮蓋4周恢復(fù)7天(n=24)，年齡相匹配的

3、正常對照組(n=24)。每組在實驗結(jié)束后分別提取鞏膜組織，處理組的實驗眼、處理組的對側(cè)眼和正常對照組的對照眼，按同一處理組內(nèi)隨機數(shù)字表每兩只鞏膜合并提取基因組RNA，real timePCR檢測不同處理眼鞏膜組織COL1α2 mRNA水平變化狀況。
　　 3.形覺剝奪性C57BL/6小鼠的近視形成期鞏膜COL1α2啟動子區(qū)域CpG島甲基化水平的改變:36只C57BL/6小鼠隨機分成2組:形覺剝奪組:單眼遮蓋4周(n=24);年齡

4、相匹配的正常對照組(n=12)。每組在實驗結(jié)束后分別提取鞏膜組織，處理組的實驗眼、處理組的對側(cè)眼和正常對照組的對照眼，按同一處理組內(nèi)隨機數(shù)字表每兩只鞏膜合并提取基因組DNA，經(jīng)過亞硫酸鹽處理后用通過克隆測序的方法檢測不同處理眼鞏膜組織COL1α2啟動子區(qū)域和第一外顯子區(qū)域CpG島甲基化狀況。
　　 統(tǒng)計方法是用SPSS11.5軟件統(tǒng)計，同一個小鼠屬組內(nèi)處理組的實驗眼和處理組的對側(cè)眼比較，采用配對t檢驗，不同小鼠屬組間比較采用獨立

5、樣本t檢驗。
　　 結(jié)果：
　　 1.形覺剝奪4周后，同一小鼠的實驗眼相比其對側(cè)眼向近視方向漂移P＜0.05。
　　 2.形覺剝奪4周，形覺剝奪眼和正常對照眼相比COL1α2 mRNA下降33.8％P=0.024(P＜0.05)，剝奪眼和對側(cè)眼之間COL1α2 mRNA水平并沒有明顯的統(tǒng)計學(xué)差異，但有下降趨勢。去除眼罩7天，實驗性近視完全恢復(fù)。
　　 3.形覺剝奪4周，形覺剝奪眼和正常對照眼COL1α2啟

6、動子區(qū)域CpG島甲基化水平不存在明顯差異，剝奪眼和對側(cè)眼之間甲基化水平并沒有明顯的統(tǒng)計學(xué)差異;形覺剝奪眼，對側(cè)眼和對照眼甲基化水平較剝奪4周未見明顯變化。
　　 結(jié)論：
　　 1.小鼠單眼形覺剝奪4周可誘導(dǎo)出相對近視;利用相干光斷層掃描儀測量小鼠眼球生物學(xué)參數(shù)可以較好反映屈光度的改變;
　　 2.C57BL/6小鼠近視模型鞏膜形覺剝奪眼和正常對照眼相比COL1α2 mRNA下降。形覺剝奪恢復(fù)組，實驗眼和正常對照眼