局部應(yīng)用苯扎氯銨誘導(dǎo)的C57BL-6小鼠干眼模型.pdf

1、目的:探究苯扎氯銨誘導(dǎo)C57BL/6小鼠干眼模型的最佳濃度，與局部應(yīng)用苯扎氯銨對結(jié)膜及頸部淋巴結(jié)中炎癥因子表達(dá)水平的影響。
　　方法:將60只小鼠分為6組，每組10只小鼠，在小鼠雙眼結(jié)膜囊內(nèi)滴入5μl不同濃度的苯扎氯銨(Benzalkonium chloride，BAC)溶液(濃度分別為0.05％、0.075％、0.10％、0.15％、0.20％、0.25％)，每天2次(9am，9pm)，持續(xù)7天，誘導(dǎo)小鼠干眼模型，另10只小鼠作

2、為正常對照組，實(shí)驗(yàn)過程中，所有小鼠均置于正常環(huán)境條件下（即溫度23±1℃，相對濕度45±5％）。7天后應(yīng)用酚紅棉線檢測淚液分泌量;俄勒岡綠染料(Oregon green dextran，OGD)熒光染色檢測角膜上皮屏障功能;免疫熒光染色檢測角膜上皮凋亡標(biāo)記物（Caspase-3、Caspase-8）與增殖標(biāo)記物(Ki67)、鱗狀上皮化生標(biāo)記物(K10)和基質(zhì)金屬蛋白酶-3（MMP-3）的表達(dá)水平;過碘酸-希夫(Periodic acid

3、-Schiff，PAS)染色檢測小鼠結(jié)膜杯狀細(xì)胞數(shù)量;qRT-PCR檢測小鼠結(jié)膜及頸部淋巴結(jié)中炎癥因子IFN-γ、IL-13、IL-17和IL-6的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:當(dāng)BAC濃度高于或等于0.1％時，各組小鼠角膜不同比例出現(xiàn)新生血管或角膜潰瘍（比例分別為0.10％BAC組:30％;0.15％BAC組:40％;0.20％BAC組:60％;0.25％BAC組:80％）;當(dāng)BAC濃度低于或等于0.075％時，各組小鼠角膜均未出現(xiàn)新生

4、血管或角膜潰瘍。0.05％BAC組、0.075％BAC組和0.1％BAC組均有淚液分泌下降趨勢，且0.075％組與對照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;OGD染色結(jié)果顯示，與對照組相比，實(shí)驗(yàn)組0.05％BAC組、0.075％BAC組、0.1％BAC組熒光染色增加，均有顯著性差異;與對照組相比，0.05％BAC組、0.075％BAC組、0.1％BAC組PAS染色陽性細(xì)胞數(shù)量與Ki67熒光染色陽性細(xì)胞數(shù)量減少，均有顯著性差異;Caspase-3、Casp

5、ase-8和MMP-3免疫熒光檢測結(jié)果顯示，經(jīng)不同濃度的BAC誘導(dǎo)后，在角膜上皮的表達(dá)量增加，且隨BAC濃度的升高，表達(dá)增強(qiáng);K10免疫熒光檢測結(jié)果顯示，BAC濃度高于或等于0.075％時，可誘導(dǎo)小鼠角膜發(fā)生鱗狀上皮化生;各組小鼠結(jié)膜及頸部淋巴結(jié)炎癥因子檢測結(jié)果顯示，經(jīng)不同濃度BAC誘導(dǎo)后，各組小鼠眼表及淋巴結(jié)中均有免疫炎癥的改變，且炎癥因子IFN-γ（Th1相關(guān)）、IL-6(Th17相關(guān))、IL-17(Th17相關(guān))表達(dá)升高，IL-1