Th17-Treg免疫失調(diào)在BALB-c和C57BL-6小鼠DSS誘導(dǎo)急性腸炎中的作用研究.pdf

1、目的:炎癥性腸病（Inflammatory bowel disease，IBD）是一種原因不明的非特異性腸道炎癥性疾病，包括潰瘍性結(jié)腸炎(Ulcerative colitis，UC)和克隆恩病(Crohn's disease，CD)，以大腸和小腸的炎癥為主要特征。IBD發(fā)病機(jī)制目前尚未完全闡述清楚，認(rèn)為該病是由T細(xì)胞及其分泌的細(xì)胞因子介導(dǎo)的自身免疫性炎癥，除了經(jīng)典的Th1和Th2型免疫應(yīng)答的偏倚，近年來發(fā)現(xiàn)Th17細(xì)胞和Treg細(xì)胞也參

2、與了IBD病變的形成。基因遺傳背景不同會導(dǎo)致該病在不同個體間出現(xiàn)明顯差異，但Th17和Treg細(xì)胞如何具體參與不同基因遺傳背景小鼠DSS誘導(dǎo)急性腸炎的發(fā)生機(jī)制尚不清楚。本實(shí)驗擬通過觀察不同基因遺傳背景小鼠在DSS誘導(dǎo)急性腸炎中腸黏膜局部相關(guān)淋巴組織內(nèi)的免疫應(yīng)答，尤其是Th17/Treg細(xì)胞及相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)的情況，比較不同基因遺傳背景小鼠對DSS誘導(dǎo)急性腸炎敏感性的差異，探討Th17和Treg細(xì)胞應(yīng)答參與急性腸炎的發(fā)生機(jī)制。
　　

3、方法:1、DSS誘導(dǎo)急性腸炎在BALB/c和C57BL/6小鼠中的建立及易感性分析。采用6-8周BALB/c小鼠和C57BL/6小鼠，給予3.5％DSS溶液自由飲用6天，建立DSS誘導(dǎo)急性實(shí)驗性腸炎模型，評估疾病活動指數(shù)(DAI)，組織病理學(xué)方法觀察腸炎的強(qiáng)弱程度。應(yīng)用流式細(xì)胞分析技術(shù)表面染色檢測中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞的比例;應(yīng)用ELISA技術(shù)檢測LPL分泌的細(xì)胞因子(IFN-γ、TNF-α、IL-4和IL-6)的含量;應(yīng)用real-ti

4、me PCR技術(shù)檢測結(jié)腸組織和腸系膜淋巴結(jié)細(xì)胞因子(IFN-γ、TNF-α、IL-12、IL-4和IL-6)mRNA的表達(dá)。2、DSS誘導(dǎo)急性腸炎后BALB/c和C57BL/6小鼠Th17和Treg細(xì)胞變化的比較。提取腸固有層淋巴細(xì)胞和腸系膜淋巴結(jié)細(xì)胞，應(yīng)用流式細(xì)胞分析技術(shù)檢測LPL和MLN中αβT、γδT、效應(yīng)性T細(xì)胞、Treg細(xì)胞及LPL中Th1和Th17細(xì)胞的比例;應(yīng)用ELISA技術(shù)檢測LPL中Th17和Treg相關(guān)細(xì)胞因子(IL

5、-17A、IL-17F、IL-22和IL-10)的含量;應(yīng)用real-time PCR技術(shù)檢測結(jié)腸組織和腸系膜淋巴結(jié)細(xì)胞因子(TGF-β、IL-10、IL-17A、IL-21、IL-22和IL-23)mRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果:1、與C57BL/6小鼠相比較，BALB/c小鼠對DSS急性腸炎易感性明顯降低。BALB/c小鼠和C57BL/6小鼠經(jīng)DSS誘導(dǎo)后均可發(fā)生急性腸炎;與C57BL/6小鼠相比較，BALB/c小鼠經(jīng)DSS誘導(dǎo)腸

6、炎DAI評分較高，生存率較長，腸炎癥狀明顯緩解。經(jīng)DSS誘導(dǎo)腸炎后，與C57BL/6小鼠相比較，BALB/c小鼠腸固有層和MLN內(nèi)中性粒細(xì)胞比例減少，腸固有層中巨噬細(xì)胞比例升高;腸固有層內(nèi)Th1型細(xì)胞因子(IFN-γ、TNF-α)含量顯著減少，而Th2型細(xì)胞因子(IL-4、IL-6)含量顯著升高;腸組織和腸系膜淋巴結(jié)內(nèi)Th1型細(xì)胞因子（IFN-γ）mRNA顯著減少，而Th2型細(xì)胞因子含量(IL-4、IL-6)mRNA顯著升高。2、57B

7、L/6小鼠與BALB/c小鼠炎癥性腸黏膜內(nèi)Th17與Treg細(xì)胞應(yīng)答水平存在明顯差異。與C57BL/6小鼠相比較，BALB/c小鼠炎癥性腸黏膜內(nèi)γδT、效應(yīng)性T細(xì)胞比例明顯下降。與C57BL/6小鼠相比較，BALB/c小鼠炎癥性腸黏膜內(nèi)Treg細(xì)胞比例和IL-10、IL-17A、IL-22mRNA明顯升高。腸固有層中Th1和Th17比例和IL-10、IL-17F、IL-22含量顯著升高。
　　結(jié)論:1、與C57BL/6小鼠相比較，

8、BALB/c小鼠對DSS誘導(dǎo)腸炎易感性明顯下降，腸炎癥狀明顯緩解。2、與C57BL/6小鼠相比較，正常BALB/c小鼠腸道黏膜相關(guān)淋巴組織內(nèi)Th1型細(xì)胞因子(IFN-γ、TNF-α)表達(dá)水平明顯降低。3、與C57BL/6小鼠相比較，BALB/c小鼠炎癥性腸黏膜內(nèi)巨噬細(xì)胞比例明顯升高;Th2型細(xì)胞因子(IL-4、IL-6)含量和mRNA表達(dá)水平明顯升高;Th17細(xì)胞比例和IL-17A、IL-22、IL-17F含量明顯升高;Treg細(xì)胞比例