代謝型谷氨酸受體2同源二聚體激活過程中單體選擇機(jī)制的研究.pdf

1、代謝型谷氨酸受體(Metabotropicglutamatereceptors,mGluRs)屬于C族G蛋白偶聯(lián)受體(G-proteincoupledreceptors,GPCRs),與G蛋白相偶聯(lián),經(jīng)細(xì)胞內(nèi)第二信使系統(tǒng)如磷脂酶C(PLC)和腺苷酸環(huán)化酶(AC)而發(fā)揮作用。同C族其他受體一樣,是組成性的二聚體,但與γ-氨基丁酸受體(GABABR)和味覺受體第一家族(TIR)不同,mGluRs為組成性同源二聚體,每個(gè)單體由捕蠅草模塊(Ve

2、nusFlytrapModual,VFT)、半胱氨酸富集區(qū)(CysteinrichRegion,CRD)、七次跨膜螺旋結(jié)構(gòu)域(HeptahelicalDomain,HD)和胞內(nèi)的C末端所組成。而同源二聚體中激活過程中的順反效應(yīng)和激活機(jī)制一直是研究的熱點(diǎn),mGluRs因其穩(wěn)定二聚化和多功能域的特性而成為研究該問題的模式受體。
　　本文以mGluR2為研究對(duì)象,檢測了其激活過程中的順反效應(yīng)和參與單體選擇機(jī)制的結(jié)構(gòu)域。首先我們利用分子生

3、物學(xué)方法構(gòu)建了mGluR2的人工異源二聚體以及VFT和i3loop上的功能缺失突變體,通過電穿孔轉(zhuǎn)染的方法將這些質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到HEK293細(xì)胞中,Flex和IP3功能檢測的結(jié)果表明在mGluR2中只存在反式激活效應(yīng),與之前報(bào)道的mGluR5中既有順式激活又有反式激活的結(jié)果不同。這表明在mGluR2的激活過程中具有一定的單體選擇機(jī)制?；趍GluR5和mGluR2激活方式的差異,我們又研究了CRD在單體選擇機(jī)制中的作用。將mGluR2的CRD