去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠BMSCs Runx2、PPAR-γ基因表達(dá)的研究.pdf

1、目的：觀察經(jīng)雌激素、葛根素、白藜蘆醇對去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠在體干預(yù)后，分離培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）Runx2、PPAR-γ基因的表達(dá)。
　　方法：1.選用65只3月齡SPF級健康雌性Sprague-Dawky（SD）大鼠隨機(jī)分為五組，分別為：假手術(shù)組（SHAM）、雌激素替代治療組（ERT）、葛根素組（PUE）、白藜蘆醇組（RES）、去卵巢組（OVX），每組13只。除假手術(shù)組外其余四組大鼠采用雙側(cè)卵巢切除法復(fù)制大鼠絕經(jīng)后骨

2、質(zhì)疏松癥模型，術(shù)后1周后給予藥物干預(yù)10周。2. ELISA法檢測大鼠血清骨堿性磷酸酶（BALP）、血清骨保護(hù)素（OPG）、抗酒石酸酸性磷酸酶-5b（TRAP-5b）、I型膠原羧基末端肽（CTX-I）；外周定量計算機(jī)斷層掃描（pQCT）測量大鼠右側(cè)股骨骨微結(jié)構(gòu)的相關(guān)參數(shù)。3.分離培養(yǎng)去卵巢大鼠BMSCs，采用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表型進(jìn)行細(xì)胞鑒定；RT-PCR法檢測BMSCs成骨調(diào)控基因Runx2、成骨標(biāo)志基因骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2（BMP-2

3、）、成脂調(diào)控基因過氧化物酶體增殖物激活受體-γ（PPAR-γ）和成脂標(biāo)志基因脂蛋白脂酶（LPL）的表達(dá)。
　　結(jié)果：1.實(shí)驗(yàn)前各組大鼠體重?zé)o明顯差異，至實(shí)驗(yàn)結(jié)束時有不同程度增加。OVX組大鼠藥物干預(yù)后4周、10周體重與同齡SHAM組比較分別增加3.9％、8.4%（P<0.05）；PUE、RES組大鼠體重與OVX組相比差異不大（P>0.05）。2. OVX組松質(zhì)骨骨礦含量及骨密度較SHAM下降（P<0.05）；PUE、RES、ERT

4、組松質(zhì)骨骨礦含量及骨密度與OVX組比較有不同程度的升高（P<0.01）；ERT、PUE、RES、OVX四組皮質(zhì)骨骨礦含量以及骨密度差異無明顯統(tǒng)計學(xué)意義。3. OVX組大鼠血清 BALP、CTX-I、TRAP-5b較SHAM組有不同程度的提高（P<0.05），ERT、PUE、RES組以上指標(biāo)較OVX組有不同程度的改善；OVX組血清OPG較SHAM組明顯下降，下降比例為36.8%（P<0.01）。4.分離BMSCs后，倒置相差顯微鏡下發(fā)現(xiàn)培

5、養(yǎng)過程中未經(jīng)干預(yù)的去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠來源的BMSCs生長較慢，至第19天左右細(xì)胞鋪滿瓶底；隨后進(jìn)行流式細(xì)胞儀鑒定發(fā)現(xiàn)BMSCs高表達(dá)CD90、低表達(dá)CD45。5.取P1代BMSCs行RT-PCR檢測，各組間Runx2、BMP-2、PPAR-γ、LPL mRNA表達(dá)水平之間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義；各組BMSCs PPAR-γ基因的表達(dá)，除了ERT低于另外四組外，其余各組之間差異均不明顯。
　　結(jié)論：分離經(jīng)葛根素、白藜蘆醇干預(yù)的去卵巢大鼠