14-3-3β在卵巢漿液性癌中的表達(dá)及其功能的初步研究.pdf

1、背景：卵巢癌是女性生殖器常見(jiàn)的三大惡性腫瘤之一，其中，上皮性卵巢癌最為常見(jiàn)。上皮性卵巢癌發(fā)病隱匿，早期沒(méi)有明顯的臨床癥狀及體征，且缺乏有效的篩查及診斷方法，超過(guò)70％的患者確診時(shí)已處于晚期，其5年生存率僅約30%，已嚴(yán)重的威脅了廣大女性的生命健康。因此，研究卵巢癌的發(fā)病機(jī)制，尋找早期篩查、診斷相關(guān)的生物標(biāo)記物，及有效的治療靶點(diǎn)是目前亟需解決的問(wèn)題。14-3-3蛋白是一類(lèi)高度保守的小分子酸性多肽，分子量約為28-33 kDa，廣泛存在于真

2、核生物體內(nèi)。到目前為止，超過(guò)200個(gè)14-3-3蛋白的結(jié)合配體被證實(shí)，通過(guò)調(diào)節(jié)各種結(jié)合配體的功能，14-3-3蛋白參與調(diào)節(jié)很多重要的細(xì)胞過(guò)程，如細(xì)胞分化，增殖，信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，囊泡運(yùn)輸?shù)?。越?lái)越多的研究證實(shí)14-3-3蛋白家族與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展有著密切聯(lián)系，在腫瘤的生長(zhǎng)和進(jìn)展中發(fā)揮著重要的作用?；谇捌诘难芯炕A(chǔ)，本實(shí)驗(yàn)擬檢測(cè)14-3-3β蛋白在卵巢漿液性腺癌組織中的表達(dá)，進(jìn)一步探索其對(duì)漿液性卵巢癌細(xì)胞生物學(xué)功能的影響。
　　目的：檢

3、測(cè)14-3-3β蛋白在卵巢漿液腺癌組織中的表達(dá)情況，分析14-3-3β的表達(dá)與卵巢漿液性腺癌臨床病理特征之間的關(guān)系；通過(guò)轉(zhuǎn)染14-3-3β過(guò)表達(dá)和干擾質(zhì)粒，改變卵巢癌細(xì)胞中14-3-3β蛋白的表達(dá)水平，進(jìn)而觀察該基因?qū)β殉舶┘?xì)胞生物學(xué)行為的影響，探究14-3-3β蛋白在卵巢癌的發(fā)展進(jìn)程中發(fā)揮的生物學(xué)作用。
　　方法：
　　1.免疫組織化學(xué)法檢測(cè)14-3-3β在100例卵巢漿液性腺癌、49例卵巢漿液性腺瘤和54例正常輸卵管傘端

4、組織標(biāo)本中的表達(dá)水平，采用統(tǒng)計(jì)方法分析14-3-3β的表達(dá)與卵巢漿液性腺癌臨床病理特征之間的關(guān)系。
　　2.轉(zhuǎn)染14-3-3β過(guò)表達(dá)和干擾質(zhì)粒到卵巢癌HO8910細(xì)胞中，利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western blot方法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞中14-3-3β的表達(dá)情況。
　　3.對(duì)轉(zhuǎn)染過(guò)表達(dá)及干擾質(zhì)粒的卵巢癌HO8910細(xì)胞進(jìn)行功能學(xué)實(shí)驗(yàn)：采用MTT法檢測(cè)14-3-3β對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖能力的影響；Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)14-3-

5、3β對(duì)腫瘤細(xì)胞遷移及侵襲能力的影響；劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)14-3-3β對(duì)腫瘤細(xì)胞劃痕愈合能力的影響；細(xì)胞流式實(shí)驗(yàn)檢測(cè)14-3-3β對(duì)腫瘤細(xì)胞周期及凋亡的影響。
　　結(jié)果：
　　1.免疫組化結(jié)果發(fā)現(xiàn)：14-3-3β在卵巢漿液性腺癌中的陽(yáng)性表達(dá)率為45%（45/100），在卵巢漿液性腺瘤中的陽(yáng)性表達(dá)率為6.5%（3/49）,在正常輸卵管傘端中的陽(yáng)性表達(dá)率為7.4%（4/54）。14-3-3β在腺癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于腺瘤和輸卵管傘

6、端組織，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.005）。14-3-3β的陽(yáng)性表達(dá)與患者年齡呈正相關(guān)，而與腫瘤細(xì)胞的分化，F(xiàn)IGO分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)明顯關(guān)聯(lián)。
　　2.與空白對(duì)照組和空質(zhì)粒組相比較，轉(zhuǎn)染14-3-3β過(guò)表達(dá)質(zhì)粒的卵巢癌HO8910細(xì)胞內(nèi)14-3-3β在mRNA水平和蛋白水平表達(dá)量均顯著上調(diào)；轉(zhuǎn)染14-3-3β干擾質(zhì)粒的卵巢癌HO8910細(xì)胞內(nèi)14-3-3β在mRNA水平和蛋白水平表達(dá)量均顯著降低。
　　3.與對(duì)照組相比較

7、，轉(zhuǎn)染14-3-3β過(guò)表達(dá)質(zhì)粒可促進(jìn)卵巢癌HO8910細(xì)胞的遷移及侵襲，促進(jìn)劃痕的愈合，抑制癌細(xì)胞的凋亡，但是對(duì)癌細(xì)胞的增殖能力和細(xì)胞周期無(wú)明顯影響。
　　4.與對(duì)照組相比較，轉(zhuǎn)染14-3-3β干擾質(zhì)粒可抑制卵巢癌HO8910細(xì)胞的遷移及侵襲，減緩劃痕的愈合，促進(jìn)癌細(xì)胞的凋亡，對(duì)癌細(xì)胞的增殖能力和細(xì)胞周期無(wú)明顯影響。
　　結(jié)論：
　　1.14-3-3β在卵巢漿液性腺癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于腺瘤和輸卵管傘端組織，可能