橙皮苷對(duì)斑馬魚(yú)酒精性脂肪肝的治療作用及其機(jī)制研究.pdf

1、酒精性脂肪肝（alcoholic fatty liver disease，AFLD）以長(zhǎng)期大量飲酒而導(dǎo)致脂肪在肝細(xì)胞中過(guò)度貯積為主要特征，是酒精性肝病(alcoholic liver disease，ALD)的早期階段，及時(shí)治療可以得到有效控制甚至逆轉(zhuǎn)，對(duì)ALD的防治意義重大。
　　中醫(yī)藥治療AFLD歷史悠久且療效顯著，深入研究中藥及其成分對(duì)AFLD的作用效果及機(jī)制，對(duì)AFLD的防治意義重大。橙皮苷是中藥陳皮、枳實(shí)的主要成分，具有

2、抗炎、抗氧化、降膽固醇等多種活性作用，對(duì)AFLD有一定的療效，而具體的作用機(jī)制尚不明確。
　　斑馬魚(yú)因其獨(dú)特的生物學(xué)優(yōu)勢(shì)，現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于疾病模型的建立和藥物篩選，其中斑馬魚(yú)急性酒精性脂肪肝模型的建立，為進(jìn)一步研究AFLD的發(fā)病機(jī)制及開(kāi)展藥物研究開(kāi)辟了新的途徑。
　　基于以上背景，本研究利用斑馬魚(yú)急性酒精性脂肪肝模型，旨在進(jìn)一步研究橙皮苷對(duì)AFLD的保護(hù)作用及其機(jī)制，為中藥在AFLD上的應(yīng)用提供依據(jù)。
　　實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇A

3、B野生型斑馬魚(yú)、肝臟熒光轉(zhuǎn)基因斑馬魚(yú)Tg(lfabp10α：eGFP)。
　　隨機(jī)挑選4dpf(days post fertilization)的斑馬魚(yú)于培養(yǎng)皿中，對(duì)照組只加培養(yǎng)用水，模型組中加入含350mM乙醇的培養(yǎng)用水，培育32小時(shí)，建立急性酒精性脂肪肝模型，收集一部分樣品進(jìn)行后續(xù)研究。隨后，隨機(jī)將模型組分為5組：0.1％DMSO組、模型組、3個(gè)濃度橙皮苷處理組(25ug/mL、12.5ug/mL、6.25ug/mL)，與對(duì)照

4、組一起置于28.5℃恒溫箱培養(yǎng)中培養(yǎng)48小時(shí)，收集各組幼魚(yú)進(jìn)行下一步研究。
　　通過(guò)油紅O染色、尼羅紅染色、HE染色技術(shù)觀察斑馬魚(yú)肝臟形態(tài)學(xué)變化、脂滴沉積情況及組織病理學(xué)改變;運(yùn)用qPCR技術(shù)來(lái)檢測(cè)目標(biāo)基因的mRNA表達(dá)。采用spss20軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（(x)±s）表示，P＜0.05視為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果表明：
　　1.相比對(duì)照組，置于含350mM乙醇的水中培育32小時(shí)的斑馬魚(yú)肝組織

5、形態(tài)改變和脂肪變程度更明顯，證實(shí)成功建立斑馬魚(yú)急性酒精性脂肪肝模型。
　　2.油紅O染色、尼羅紅染色顯示橙皮苷可顯著減輕酒精導(dǎo)致的肝內(nèi)脂滴沉積和肝臟形態(tài)學(xué)改變，斑馬魚(yú)石蠟切片的HE染色證實(shí)橙皮苷能改善酒精導(dǎo)致的肝臟病理變化。說(shuō)明橙皮苷能改善酒精所致的斑馬魚(yú)肝臟脂肪變。
　　3.橙皮苷通過(guò)調(diào)節(jié)酒精代謝、脂質(zhì)代謝以及抵抗內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和DNA損傷來(lái)抵御酒精對(duì)肝臟的損害，具體表現(xiàn)為下調(diào)cyp2y3，cyp3a65，fads2，fasn