基于登革熱病毒非結(jié)構(gòu)蛋白NS3的高通量藥物篩選.pdf

1、登革病毒是一種能引起人類登革熱，出血性登革熱和登革休克綜合征的黃病毒，其在世界范圍內(nèi)已造成了很大的危害，引起了全球的擔憂和恐慌。
　　登革病毒非結(jié)構(gòu)蛋白NS3是一種多功能蛋白，其N端具有Ser蛋白酶活性， C端具有NTR磷酸酶及RNA解旋酶的活性，在病毒RNA的復(fù)制和病毒前體的加工過程中發(fā)揮著重要的作用。NS2B作為其輔助因子，通過與NS3形成異源二聚體復(fù)合物來激活其蛋白酶活性，并水解切割其他結(jié)構(gòu)蛋白和非結(jié)構(gòu)蛋白。若能抑制 NS3

2、的活性，就能干擾病毒的復(fù)制和成熟，從而實現(xiàn)抗病毒的作用。因此，登革熱病毒絲氨酸蛋白酶NS3已成為抗病毒藥物的重要靶標。
　　本研究以絲氨酸蛋白酶NS3作為分子靶標，從分子克隆構(gòu)建重組質(zhì)粒開始，利用大腸桿菌E.coli BL21（DE3）獲得表達量較高的蛋白酶NS2B-NS3；并利用金屬離子親和層析，離子交換層析，分子排阻色譜等方法進行分離純化，獲得較高純度的蛋白；而后采用熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)測定其活性，并建立了穩(wěn)定的酶活體系（Z-