MicroRNA-184在致心律失常性心肌病中的病理作用機制研究.pdf

1、目的:
　　研究Micro-RNA(miRNA)在致心律失常性心肌病(AC)發(fā)病機制中的作用
　　方法與結(jié)果:
　　對HL-1及Pkp2敲低HL-1心肌細胞(HL-1Pkp2-shRNA)進行了含有750個miRNA的芯片篩查，發(fā)現(xiàn)了59個顯著性差異表達的miRNA。其中miRNA-184(miR-184)是在HL-1 Pkp2-shRNA中較對照組細胞表達下降最顯著的一個miRNA。同時，miR-184在AC小鼠模型

2、的心臟組織及心肌細胞中均較正常小鼠顯著降低。miR-184在非成熟心肌細胞及心臟CD44+間充質(zhì)祖細胞中表達最高，并且其表達量隨心臟的發(fā)育逐漸降低。染色質(zhì)免疫共沉淀(ChIP)實驗表明，在AC模型中被抑制的E2F信號通路通過E2F1與miR-1845'基因區(qū)域結(jié)合而調(diào)控miR-184的表達。通過對E2F1激動劑CCND1的過表達或?qū)2F1抑制劑RB1的抑制，均能增加miR-184的表達。另一方面，ChIP實驗發(fā)現(xiàn)DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶1（

3、DNMT1）在HL-1 Pkp2-shRNA心肌細胞中與miR-184啟動子區(qū)域大量結(jié)合，導(dǎo)致CpG位點過度甲基化，從而使miR-184表達受到沉默。去甲基化藥物5-Aza-2'-Deoxycytidine（5-Aza-D）的使用以及轉(zhuǎn)染針對Dnmt1的shRNA以抑制Dnmt1的表達均能增加miR-184的表達。在將miR-184的預(yù)測靶基因與HL-1和HL-1Pkp2-shRNA心肌細胞中差異表達的基因進行的配對研究顯示，差異表達的

4、miR-184靶基因在細胞生長，分化及死亡過程中起到主要作用。其中，A gpat1及Agpat3這兩個脂肪代謝中的關(guān)鍵參與基因，被證明是miR-184的直接作用靶點。在HL-1及心臟CD44+細胞中進行的脂肪分化誘導(dǎo)實驗中，miR-184敲低組與對照組相比均能更顯著的誘導(dǎo)心肌細胞脂肪化。反之，miR-184過表達組與對照組相比則能夠抑制心肌細胞脂肪化。
　　結(jié)論:
　　本文第一次在AC模型中進行microRNA芯片篩查，發(fā)現(xiàn)