緩慢型心律失?；颊進(jìn)icroRNA表達(dá)水平研究.pdf

1、心律失常是心血管疾病眾中，最為嚴(yán)重的疾病之一。也是臨床上最常見(jiàn)的心血管疾病。近些年來(lái)，緩慢型心律失常日益增加的發(fā)病率引起了人們的注意，其發(fā)病機(jī)制也越來(lái)越受到了人們的關(guān)注。當(dāng)下，診治緩慢型心律失常的治療方案之一為植入人工心臟起搏器。心臟起搏植入術(shù)的應(yīng)用已有50多年的歷史了。如今的人工心臟起搏器，無(wú)論是結(jié)構(gòu)還是功能，已經(jīng)達(dá)到了一個(gè)十分高的水準(zhǔn)。但是在如今，植入起搏器仍然存在一些難以克服的缺陷和困難。
　　近些年來(lái)，關(guān)于microRNA

2、的研究越來(lái)越多，其在心血管疾病方面的研究越來(lái)越透徹。在心肌細(xì)胞中，miR-1，miR-133，let-7等表達(dá)極為豐富，且miR-21與miR-208等microRNAs與房顫及心律失常的發(fā)生有著密切的關(guān)聯(lián)。但是microRNA在緩慢型心律失常方面的研究卻少之又少，進(jìn)展相對(duì)緩慢。近些年來(lái)，緩慢型心律失常的發(fā)病率日益增加，且其缺乏有效的早期預(yù)警診斷方法及標(biāo)志物。
　　目的:本實(shí)驗(yàn)以人體內(nèi)穩(wěn)定存在的U6為內(nèi)參，通過(guò)對(duì)比緩慢型心律失?；?/p>

3、者和健康人體內(nèi)microRNA-1，microRNA-21，microRNA-133，microRNA-208等microRNAs相對(duì)于內(nèi)參U6的相對(duì)表達(dá)量，觀察microRNA和緩慢型心律失常之間是否存在著一定的聯(lián)系，并深入探討microRNA與緩慢型心律失常發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。
　　方法:一、收集緩慢型心律失?；颊呒敖】刁w檢者的當(dāng)天新鮮全血，并將收集的血清分成三組。分組:病態(tài)竇房結(jié)綜合征患者組(sick sinus syndrom

4、e，SSS)、房室傳導(dǎo)阻滯組(atrioventricular block，AVB)、健康體檢者組(health，H)。二、用柱狀法，經(jīng)過(guò)裂解紅細(xì)胞，分相，沉淀及洗滌等步驟將各組新鮮全血的RNA提取出來(lái)。三、將提取出來(lái)的RNA用紫外分光光度計(jì)測(cè)量濃度和純度(A260/A280)，保留高純度的RNA(A260/A280＞2)進(jìn)行下一步逆轉(zhuǎn)錄。四、利用逆轉(zhuǎn)錄儀將得出的RNA產(chǎn)物，加入microRNA-1，microRNA-21，microR

5、NA-133，microRNA-208及內(nèi)參microRNA-U6作為引物，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。五、用pcr儀器將cDNA通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR（real-time PCR）擴(kuò)增，測(cè)出擴(kuò)增產(chǎn)物的CT值（每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號(hào)到達(dá)設(shè)定的閾值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)），檢測(cè)出對(duì)比內(nèi)參U6，各種microRNA在各緩慢型心律失常組中，相對(duì)于健康人組的相對(duì)表達(dá)量，并做統(tǒng)計(jì)分析。
　　結(jié)果:(1)、SSS組相對(duì)于H組，microRNA-21降低至13

6、2％(P＜0.05)，其余microRNA-1，microRNA-133，microRNA-208的表達(dá)水平與健康人組的表達(dá)相比無(wú)顯著差異(P＞005)。(2)、AVB組相對(duì)于H組，microRNA-1降低至18，7％，microRNA-21降至7.3％，microRNA-208降至22.2％(P＜0.05)，microRNA-133的表達(dá)與健康人組的表達(dá)相比無(wú)顯著差異(P＞0.05)。
　　結(jié)論:1、在病態(tài)竇房結(jié)綜合征病人中，m