基于MAPK和NF-κB信號(hào)通路的姬松茸多糖抑制哮喘氣道炎癥的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:通過(guò) OVA誘導(dǎo)建立支氣管哮喘小鼠模型，并給予姬松茸多糖進(jìn)行治療，研究姬松茸多糖對(duì)支氣管哮喘氣道炎癥的影響及其可能的作用機(jī)制。
　　方法:取正常雌性BALB/c小鼠40只，體重18±5g，隨機(jī)分為5組，每組8只，正常對(duì)照組、哮喘模型組、姬松茸多糖低劑量治療組、姬松茸多糖高劑量治療組、地塞米松陽(yáng)性對(duì)照組。除正常對(duì)照組外，其余3組于第1天、第14天分2次腹腔注射抗原液1ml（含卵蛋白100mg，氫氧化鋁干粉100mg）致敏，正常

2、對(duì)照組用等量的生理鹽水進(jìn)行致敏。第22天開(kāi)始將小鼠放入自制的不完全封閉的箱內(nèi)，給予1％卵蛋白（OVA）溶液用霧化器吸入激發(fā)，每天1次，每次20分鐘，連續(xù)4天。正常對(duì)照組用等量的生理鹽水進(jìn)行激發(fā)。每次霧化吸入激發(fā)前1小時(shí)給予姬松茸多糖干預(yù)，姬松茸多糖低劑量組給予200 mg/Kg灌胃、姬松茸多糖高劑量組給予400mg/Kg灌胃，正常對(duì)照組和哮喘模型組灌胃等量的生理鹽水，每天1次,共10天。第25天，末次激發(fā)結(jié)束后24小時(shí)內(nèi)，各組小鼠均以乙

3、醚麻醉后，按要求取標(biāo)本。采末次致敏加強(qiáng)24h乙醚麻醉后處死小鼠，剪開(kāi)頸部皮膚，并于氣管正中處剪一小口，插入氣管套管。以磷酸鹽緩沖液4mL行支氣管肺泡灌洗，來(lái)回沖洗3次，收集支氣管肺泡灌洗液（BALF）和肺組織標(biāo)本等。通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)支氣管肺泡灌洗液(BALF)中 IL-4、IL-5、IL-13含量，用Diff-Quick染色觀察 BALF中炎癥細(xì)胞分類和數(shù)目變化。通過(guò) HE染色法、PAS染色法觀察小鼠肺組織炎性細(xì)胞浸

4、潤(rùn)等病理變化;免疫組織化學(xué)染色法觀察小鼠肺組織內(nèi) NF-κB p65蛋白的表達(dá)情況;免疫印跡法檢測(cè)各組小鼠肺組織內(nèi)p-ERK、p-JNK、p-p38MAPK的蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果:（1）與正常對(duì)照組相比較，哮喘模型組小鼠 BALF中炎癥細(xì)胞總數(shù)和中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)較明顯升高，差異顯著(P<0.05)；姬松茸多糖低、高劑量組小鼠BALF中炎癥細(xì)胞總數(shù)和中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)較哮喘模型組明顯降低

5、，差異顯著(P<0.05)，與正常組比較，哮喘模型組小鼠BALF中IL-4、IL-5、IL-13水平升高，差異顯著(P<0.05)；姬松茸多糖低、高劑量組小鼠BALF中細(xì)胞因子IL-4、IL-5、IL-13水平降低，與哮喘模型組比較，差異顯著(P<0.05)（2）通過(guò)觀察肺組織HE、PAS染色可見(jiàn)，哮喘模型組小鼠支氣管痙攣，管腔狹窄，上皮細(xì)胞腫脹、脫落，支氣管及血管周圍有大量炎癥浸潤(rùn)，以嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞為主，黏膜及黏膜

6、下層水腫明顯。姬松茸多糖低、高劑量組小鼠肺組織病理學(xué)改變較哮喘模型組顯著減輕。正常組小鼠肺組織無(wú)明顯病理改變。姬松茸多糖低、高劑量組之間比較，無(wú)顯著差異(P>0.05)。（3）通過(guò)觀察免疫組化染色：NF-κBp65的陽(yáng)性表達(dá)在哮喘模型組中水平明顯增高；而在姬松茸多糖提取物的兩組陽(yáng)性蛋白表達(dá)水平明顯降低。（4）免疫印跡法檢測(cè)結(jié)果顯示：p-ERK、p-p38MAPK、p-JNK的表達(dá)在哮喘模型組明顯高于對(duì)照組（P＜0.05）；而在姬松茸多糖