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文檔簡介
1、目的:探討苦瓜提取物(BME)在脂多糖(LPS)誘導巨噬細胞系RAW264.7中的抗炎作用,并且揭示BME在抑制巨噬細胞炎癥反應中的機制。
方法:培養(yǎng)鼠源的巨噬細胞系RAW264.7,檢測不同濃度BME對該細胞的毒性作用,選最適濃度的BME預處理,再用LPS刺激實驗細胞,用Real-time PCR和Western blot法檢測TNF-α、COX-2和iNOS的mRNA和蛋白表達的影響。用ELISA法檢測細胞分泌液中TNF-
2、α和PGE2,用Griess reaction法檢測NO的產(chǎn)生。BME抑制TNF-α、PGE2和iNOS產(chǎn)生的機制用Western blot法檢測核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)p65的磷酸化情況。用脂質體2000將NF-κBp65 siRNA和對照siRNA轉染巨噬細胞系RAW264.7,Western blot法檢測p65的表達及Real-time PCR法檢測TNF-α、COX-2和iNOS
3、的表達,同時用NF-κBp65的抑制劑做同樣檢測。
結果:BME明顯抑制LPS刺激的巨噬細胞系RAW264.7產(chǎn)生的TNF-α、PGE2和NO,p<0.05,有統(tǒng)計學意義。通過抑制NF-κBp65通路BME抑制TNF-α、COX-2和iNOS的產(chǎn)生,使用NF-κ Bp65 siRNA和抑制劑后可以降低LPS刺激的TNF-α、COX-2和iNOS的產(chǎn)生。結論:BME有在RAW264.7中抑制LPS誘導的炎癥相關因子產(chǎn)生的作用,并
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