通過(guò)NF-κB通路防治吸入性損傷的研究.pdf

1、背景:
　　嚴(yán)重的吸入性損傷仍是燒傷死亡的主要原因之一，由其引發(fā)的急性呼吸窘迫或呼吸衰竭的死亡率可高達(dá)50％以上。在吸入性損傷早期，肺組織中的巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞釋放的大量急性炎癥因子不但可以造成肺局部組織炎癥和呼吸功能障礙，進(jìn)一步發(fā)展還可引發(fā)全身過(guò)度炎癥反應(yīng)和多器官功能衰竭，而多器官功能障礙正是導(dǎo)致吸入性損傷高死亡率的直接原因。就目前臨床救治情況來(lái)看，尚無(wú)有效藥物能逆轉(zhuǎn)病程向多器官功能障礙的發(fā)展。NF-κB通路是近

2、年來(lái)研究較多的一個(gè)炎性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，可編碼轉(zhuǎn)錄多種炎癥因子、趨化因子，在吸入性損傷早期，該通路在巨噬細(xì)胞內(nèi)的過(guò)度活化與后續(xù)的全身炎癥反應(yīng)綜合征的發(fā)生密切相關(guān)。因此，為了降低吸入性損傷所致的高病死率，應(yīng)該著眼于抑制吸入傷后早期大量炎癥因子的過(guò)度產(chǎn)生這一病理改變情況，以期阻止病程向后期的多器官功能障礙發(fā)展。
　　實(shí)驗(yàn)一一種小鼠煙霧吸入性損傷模型的制作
　　目的:建立一種小鼠煙霧吸入性損傷模型。方法:自行設(shè)計(jì)致傷裝置，用松木屑加煤

3、油作為發(fā)煙材料，按照不同的致傷時(shí)長(zhǎng):6min、8min、10min、12min、14min、16min，讓小鼠在密閉環(huán)境中吸入煙霧，觀察傷后小鼠的臨床表現(xiàn)、72h內(nèi)生存狀況，以及傷后死亡小鼠的肺組織病理改變。結(jié)果:(1)除16min組小鼠在致傷過(guò)程中全部死亡外，其余各組小鼠在傷后均發(fā)生呼吸頻率加快，隨后癥狀逐漸緩解;(2)72h生存率:6min組為100％，8min組為97.3％，10min組為83％，12min組為65％，14min組

4、為50％，16min組為0;(3)病理切片顯示:死亡小鼠傷肺內(nèi)有不同程度的肺血管充血，炎細(xì)胞浸潤(rùn)，肺水腫，且以傷后24h死亡的小鼠肺組織病理改變最為明顯。結(jié)論:(1)在本實(shí)驗(yàn)條件下，12min至14min的致傷時(shí)長(zhǎng)能對(duì)小鼠造成中重度的煙霧吸入性損傷，6min至10min致傷時(shí)長(zhǎng)不能對(duì)小鼠造成廣泛致傷，16min的致傷時(shí)長(zhǎng)則是小鼠耐受缺氧的上限;(2)該模型是一種簡(jiǎn)單經(jīng)濟(jì)相對(duì)穩(wěn)定的小鼠煙霧吸入性損傷致傷方法。
　　實(shí)驗(yàn)二肺巨噬細(xì)胞與

5、煙霧吸入后肺病理性損傷關(guān)系的研究
　　目的:觀察肺巨噬細(xì)胞在煙霧吸入傷后小鼠肺部炎癥反應(yīng)中所起的作用，探討其對(duì)肺病理?yè)p傷的意義。方法:48只BALB/e小鼠，隨機(jī)分成4組:正常對(duì)照組;A組:煙霧致傷組;B組:氯磷酸二鈉脂質(zhì)體+煙霧致傷組:C組:生理鹽水+煙霧致傷組，每組12只，A組傷前不做任何處理，B組傷前24h通過(guò)氣道給予氯磷酸二鈉脂質(zhì)體，C組傷前24h通過(guò)氣道給予生理鹽水，對(duì)3組小鼠進(jìn)行煙霧致傷，觀察72h內(nèi)小鼠生存率變化，7

6、2h后各組存活小鼠處死，取肺組織觀察病理變化，ELISA測(cè)定肺組織內(nèi)TNF-α含量，免疫組化檢測(cè)肺巨噬細(xì)胞清除效果并測(cè)定肺組織中NF-κBp65的活化情況。結(jié)果:(1)72h生存率A組為50％，B組為83.3％，C組為58.3％;(2)A組和C組小鼠肺組織可見(jiàn)明顯毛細(xì)血管充血、肺水腫、炎細(xì)胞浸潤(rùn)，B組小鼠肺組織充血、肺水腫、炎細(xì)胞浸潤(rùn)程度較輕;(3)A組和C組小鼠肺組織中TNF-α含量高于B組(p＜0.05)，A組和C組小鼠肺組織的含量

7、無(wú)明顯差異（p＞0.05）;(4)疫組織化學(xué)評(píng)分A組和C組均高于B組(p＜0.05)，而A組和C組之間未見(jiàn)明顯差異(p＞0.05)。結(jié)論:肺巨噬細(xì)胞在煙霧吸入性損傷后，通過(guò)NF-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路對(duì)炎癥因子的表達(dá)進(jìn)行調(diào)控，促進(jìn)了急性肺損傷的發(fā)生發(fā)展。
　　實(shí)驗(yàn)三硼替佐米干預(yù)NF-κB通路對(duì)煙霧吸入性損傷的保護(hù)作用及可能機(jī)制的研究
　　目的:探討硼替佐米對(duì)煙霧吸入性損傷后小鼠肺組織的保護(hù)作用及可能機(jī)制。方法:健康的BALB/c小

8、鼠48只，隨機(jī)分為正常對(duì)照組，煙霧致傷組，傷前預(yù)先給藥組，傷后12h給藥組，24h給藥組，每組8只。致傷組全部小鼠復(fù)制煙霧吸入性損傷模型，按照設(shè)定的時(shí)間點(diǎn)給藥，給藥后24h處死小鼠，ELISA測(cè)定小鼠血清中TNF-α的含量，免疫組織化學(xué)測(cè)定小鼠肺組織內(nèi)NF-κB的活化情況，病理切片觀察小時(shí)肺組織損傷狀況。結(jié)果:(1)72h生存率煙霧致傷組為50％，預(yù)先給藥組為60％，12h給藥組為90％，24h給藥組為70％;(2)煙霧致傷組和預(yù)先給藥

9、組小鼠肺組織可見(jiàn)明顯毛細(xì)血管充血、肺水腫、炎細(xì)胞浸潤(rùn)，12h給藥組小鼠肺組織充血、肺水腫、炎細(xì)胞浸潤(rùn)程度較輕;(3)煙霧致傷組、預(yù)先給藥組和24h給藥組小鼠血清中TNF-α含量高于12h給藥組組(p＜0.05)，正常對(duì)照組和12h給藥組小鼠血清中TNF-α含量的含量無(wú)明顯差異（p＞0.05）;(4)免疫組織化學(xué)評(píng)分顯示煙霧致傷組、預(yù)先給藥組和24h給藥組小鼠各組織中NF-κ3評(píng)分高于12h給藥組(p＜0.05)，而正常對(duì)照組和12h給藥