氡致肺損傷中NF-κB-TFAM-mtDNA通路的改變.pdf

1、目的：探討NF-κB/TFAM/mtDNA通路在氡致肺及支氣管上皮細胞損傷中的作用，為闡明氡致肺癌的分子機制提供實驗資料。
　　方法：(1)雌性 BALB/c小鼠進行吸入染毒，染毒劑量分別達30、60和120WLM后，檢測NF-κB和TFAM在肺組織中的表達情況，測定組織內(nèi)ATP水平的變化。組織病理學HE染色觀察小鼠肺組織病理學改變。Western-blot檢測肺組織中NF-κB p65、TFAM及COXⅡ的蛋白表達，Real-t

2、ime PCR檢測肺組織中NF-κB p65、TFAM及COXⅡ的基因表達。(2)對人支氣管上皮細胞（Human bronchial epithelia，HBE）進行氡染毒，流式細胞術DCFH-DA熒光探針測定細胞內(nèi)活性氧（Reactive oxygen species，ROS）；JC-1熒光探針測定線粒體膜電位（Mitochondrial membrane potential，MMP）；PI單染法分析細胞周期分布。同時，測定細胞中AT

3、P水平的改變。Western-blot檢測NF-κB p65、TFAM、COXⅡ蛋白的表達，Real-time PCR檢測NF-κB p65、TFAM、COXⅡ基因的表達。(3)雙熒光素酶報告基因?qū)嶒灆z測NF-κB p65與TFAM啟動子區(qū)域的結合。將NF-κB p65過表達質(zhì)粒和干擾RNA轉(zhuǎn)染至HBE染氡10代細胞（記做HR10）中，Western-blot和Real-time PCR檢測TFAM蛋白和基因的表達以及mtDNA拷貝數(shù)的

4、變化。將TFAM過表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至HR10細胞，檢測mtDNA拷貝數(shù)的改變。
　　結果：（1）染氡組小鼠肺組織肺泡壁增厚，肺組織中出現(xiàn)炎性細胞浸潤，肺泡間隔增厚，部分肺泡壁破裂，氣道平滑肌增生變厚。NF-κB p65、TFAM、COXⅡ的表達顯著增高，ATP水平無明顯改變（2）氡染毒HBE細胞中ROS水平降低，MMP升高，細胞周期阻滯于G1期，細胞中ATP水平上升。NF-κB p65、TFAM、COXⅡ的表達顯著增高。（3）NF-κ