氡致肺損傷中NF-κB-TFAM-mtDNA通路的改變.pdf

1、目的：探討NF-κB/TFAM/mtDNA通路在氡致肺及支氣管上皮細(xì)胞損傷中的作用，為闡明氡致肺癌的分子機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)資料。
　　方法：(1)雌性 BALB/c小鼠進(jìn)行吸入染毒，染毒劑量分別達(dá)30、60和120WLM后，檢測(cè)NF-κB和TFAM在肺組織中的表達(dá)情況，測(cè)定組織內(nèi)ATP水平的變化。組織病理學(xué)HE染色觀察小鼠肺組織病理學(xué)改變。Western-blot檢測(cè)肺組織中NF-κB p65、TFAM及COXⅡ的蛋白表達(dá)，Real-t

2、ime PCR檢測(cè)肺組織中NF-κB p65、TFAM及COXⅡ的基因表達(dá)。(2)對(duì)人支氣管上皮細(xì)胞（Human bronchial epithelia，HBE）進(jìn)行氡染毒，流式細(xì)胞術(shù)DCFH-DA熒光探針測(cè)定細(xì)胞內(nèi)活性氧（Reactive oxygen species，ROS）；JC-1熒光探針測(cè)定線粒體膜電位（Mitochondrial membrane potential，MMP）；PI單染法分析細(xì)胞周期分布。同時(shí)，測(cè)定細(xì)胞中AT

3、P水平的改變。Western-blot檢測(cè)NF-κB p65、TFAM、COXⅡ蛋白的表達(dá)，Real-time PCR檢測(cè)NF-κB p65、TFAM、COXⅡ基因的表達(dá)。(3)雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)檢測(cè)NF-κB p65與TFAM啟動(dòng)子區(qū)域的結(jié)合。將NF-κB p65過表達(dá)質(zhì)粒和干擾RNA轉(zhuǎn)染至HBE染氡10代細(xì)胞（記做HR10）中，Western-blot和Real-time PCR檢測(cè)TFAM蛋白和基因的表達(dá)以及mtDNA拷貝數(shù)的

4、變化。將TFAM過表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至HR10細(xì)胞，檢測(cè)mtDNA拷貝數(shù)的改變。
　　結(jié)果：（1）染氡組小鼠肺組織肺泡壁增厚，肺組織中出現(xiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，肺泡間隔增厚，部分肺泡壁破裂，氣道平滑肌增生變厚。NF-κB p65、TFAM、COXⅡ的表達(dá)顯著增高，ATP水平無明顯改變（2）氡染毒HBE細(xì)胞中ROS水平降低，MMP升高，細(xì)胞周期阻滯于G1期，細(xì)胞中ATP水平上升。NF-κB p65、TFAM、COXⅡ的表達(dá)顯著增高。（3）NF-κ